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palimmo
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
 Inserito il - 15 febbraio 2010 : 16:37:18
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Ciao.
In questi giorni sto facendo dei test per verificare se i miei ceppi (Lb e Lc) sono in grado di crescere in condizioni particolari.
I ceppi sono stati consegnati al sottoscritto in brodo (provetta da 10 ml) di MRS e M17 rispettivamente.
Dato che i giorni e le settimane passano, ogni tanto devo rinfrescarli.
1° perplessità:
per effettuare i test ho bisogno di una coltura overnight. Quindi, il giorno precedente, devo effettuare il rinfresco della coltura.
Prelevo una aliquota e la trasferisco in 10 ml (una nuova provetta) di brodo fresco che metto ad incubare per una notte.... (poi quella provetta la incubero' in det. condizioni come da test, da essa faro' diluizioni seriali, ecc..)
Io tendenzialmente trasferisco 1 ml. Ma é corretto? Forse dovrei trasferire 100 microlitri?
Cio' puo' influenzare i test che compio successivamente?
2° perplessità
I giorni di lavoro passano. Tra un rinfresco e l'altro chi mi garantisce che la mia coltura che vado testando sia ancora pura?
Questo mi porta a ritenere utile, almeno una volta a settimana, controllare la purezza dei miei campioni.
Potrei guardarli al microscopio...ma cosi' potrei solo distinguere lieviti da cocchi e da bastoncini... E se avessi nello stesso brodo due o tre ceppi di Lc differenti? Devo ricorrere per forza allo studio molecolare?
grazie in anticipo per qualsiasi suggerimento!
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mak_steon
Utente Junior
138 Messaggi |
Inserito il - 15 febbraio 2010 : 17:01:23
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1°) Anche io trasferisco sempre 1 mL in 9, ma solo per comodità.
In realtà dipende da diverse cose, prime fra tutte le condizioni di partenza dell'esperimento e il tipo di batteri che hai (es. alcune specie in una notte si replicano pochissimo quindi se metti poca coltura magari non arrivi alla giusta quantità il giorno dopo).
Anche le condizioni di partenza dell'esperimento influiscono, nel senso che dipende da quante cellule, o biomassa, o densità ottica, o altro ti servono all'inizio. Hai detto che farai diluizioni seriali, quindi immagino che farai più esperimenti cambiando soltanto l'inoculo, giusto?
Io farei anche delle semine in modo da sapere il numero preciso e magari confrontarlo con altre prove.
2)Se la coltura di partenza è pura e il rinnovo è fatto bene, il ceppo dovrebbe essere sempre lo stesso (escludendo mutazioni).
Per essere più sicuro, ogni tanto potresti fare degli strisci e purificare ulteriormente il tuo ceppo.
Per essere sicurissimo però, secondo me devi ricorrere alla biologia molecolare; sicuramente con il microscopio e basta non fai niente.
Ciao   |
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palimmo
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 15 febbraio 2010 : 17:22:14
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Citazione:
Messaggio inserito da mak_steon
1°) Anche io trasferisco sempre 1 mL in 9, ma solo per comodità.
In realtà dipende da diverse cose, prime fra tutte le condizioni di partenza dell'esperimento e il tipo di batteri che hai (es. alcune specie in una notte si replicano pochissimo quindi se metti poca coltura magari non arrivi alla giusta quantità il giorno dopo).
Anche le condizioni di partenza dell'esperimento influiscono, nel senso che dipende da quante cellule, o biomassa, o densità ottica, o altro ti servono all'inizio. Hai detto che farai diluizioni seriali, quindi immagino che farai più esperimenti cambiando soltanto l'inoculo, giusto?
Io farei anche delle semine in modo da sapere il numero preciso e magari confrontarlo con altre prove.
2)Se la coltura di partenza è pura e il rinnovo è fatto bene, il ceppo dovrebbe essere sempre lo stesso (escludendo mutazioni).
Per essere più sicuro, ogni tanto potresti fare degli strisci e purificare ulteriormente il tuo ceppo.
Per essere sicurissimo però, secondo me devi ricorrere alla biologia molecolare; sicuramente con il microscopio e basta non fai niente.
Ciao
1) Io di solito trasferisco 1 mL in 10 ml di brodo. Ma alcuni colleghi penso trasferiscano 100 microlitri in 10 ml.
A me interessa essenzialmente che crescano...
Il giorno successivo ne prelevo 100 microlitri e li trasferisco in 10 ml di brodo a pH 2 (questo è un esempio di test).
Pongo ad incubare per 3h a 37°C.
Fatto cio' diluisco alla 10^-2 (100 microlitri in 9.9 ml di ringer), cosi in serie la -4 e -6.
Poi piastro per incorporamento (1 ml della diluizione nella petri dish).
2)Condivido l'idea di fare uno striscio...per quanto in realtà potrebbe rilevarsi poco utile (lavoro con ceppi appartenenti alla stessa specie...quindi credo abbiano una morfologia identica se non simile...) |
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