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giulella
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
 Inserito il - 26 febbraio 2010 : 11:09:01
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Ciao a tutti!
Qualcuno sa dirmi come posso rimuovere la contaminazione genomica dall'RNA? Ho fatto l'estrazione con il Trizol e trattamento con Dnasi, ma purtroppo ottengo delle bande dopo aver fatto una PCR sull'RNA 
Come potrei recuperare il mio RNA? Ripetendo il trattamento con la Dnasi?
Grazie a tutti
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
 Inserito il - 26 febbraio 2010 : 11:35:23
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| puoi provare con un kit di purificazione dell'Rna... |
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cami
Utente Junior
Città: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 26 febbraio 2010 : 11:38:16
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io ti consiglierei di controllare bene i reagenti che usi... in genere è raro che il trattamento con la DNAsi non funzioni (immagini che tu stia utilizzando i kit invitrogen o promega), per cui prima di ripeterlo mi toglierei il dubbio che non ci sia un problema nella retrotrascrizione o nella PCR (ammesso che tu non l'abbia già fatto..). io sto dando per scontato che "PCR sull'RNA" significhi che hai fatto l'RT sull'RNA e poi la PCR per il gene, o il normalizzatore.. i controlli negativi come ti sono venuti?
un altra opzione è che tu non veda un amplicone, ma un dimero di primer, a volte capita che si veda questa banda nei controlli negativi, e se il tuo amplicone è di dimensioni molto piccole (dalle 100bp in giù), l'altezza della banda può essere circa la stessa, se il gel ha corso poco... se questo è il caso, ti consiglierei di far correre di più il tuo gel, in modo da separare bene le bande nel caso non si trovino alla stessa altezza. se invece sono proprio uguali allora avrai una contaminazione (vedi sopra)...
buona fortuna! |
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