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valderica
Nuovo Arrivato

Prov.: Avellino

36 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2010 : 18:05:20

ciao a tutti!c'� qualcuno che potrebbe chiarirmi un p� le idee su re-ChIP e ChIP on chip?cosa sono?a cosa servono?quando � opportuno ricorrere a queste tecniche?in cosa differiscono dalla ChIP?

non c'ho capito niente...
grazie!ciao ciao

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2010 : 19:48:37

Benvenuta valderica!
Mi fa piacere vedere che finalmente qualcuno scrive correttamente "ChIP on chip"

, comunque il forum � dotato della funzione cerca, utilizzandola puoi trovare delle discussioni in cui l'argomento � gi� stato trattato, come ad es. queste:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1542#6555
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=4031

per quanto riguarda la re-ChIP non � altro che due ChIP una di seguito all'altra, si immunoprecipita con un anticorpo e poi con un altro anticorpo in questo modo si possono studiare 2 proteine che sono legate alla stessa sequenza di DNA.

valderica
Nuovo Arrivato

Prov.: Avellino

36 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2010 : 20:23:55

grazie

grazie a molecular lab ho imparato molte cose.

so della funzione cerca ma (ops!) stavolta sono andata direttamente sul forum senza prima controllare...

grazie per aver risposto...ho controllato sui link suggeriti..per� vorrei capire meglio delle cose.

nella ChIP on chip alla fine col DNA ottenuto dalla ChIP si fa un DNA chip(e quindi il DNA ottenuto fa da sonda sul vetrino)?oppure si fa un protein chip?in quest'ultimo caso sarebbe un controllo positivo per la ChIP fatta precededntemente?
poi vorrei chiedere un'altra cosa sulla re-ChIP.hai detto che si immunoprecipita prima con un anticorpo e poi con un altro anticorpo.l'anticorpo usato dopo una prima ChIP viene aggiunto dopo o insieme al primo?� un anticorpo secondario specifico per l'anticorpo che ha legato la proteina specifica per la sequenza di DNA(promotore)?si tratta anche per la re-ChIP di un controllo di quanto si ottiene nella ChIP?grazie

ciao

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2010 : 10:46:09

Citazione:
Messaggio inserito da valderica

nella ChIP on chip alla fine col DNA ottenuto dalla ChIP si fa un DNA chip(e quindi il DNA ottenuto fa da sonda sul vetrino)?oppure si fa un protein chip?in quest'ultimo caso sarebbe un controllo positivo per la ChIP fatta precededntemente?

DNA chip, quello che ti interessa � individuare la sequenza a cui si lega la proteina X, non un controllo positivo della tua IP che non avrebbe molto senso.

Citazione:
Messaggio inserito da valderica

poi vorrei chiedere un'altra cosa sulla re-ChIP.hai detto che si immunoprecipita prima con un anticorpo e poi con un altro anticorpo.l'anticorpo usato dopo una prima ChIP viene aggiunto dopo o insieme al primo?

viene utilizzato dopo,prima immunoprecipiti con uno, raccogli l'immunoprecipitato e poi lo "re-immunoprecipiti" con il secondo anticorpo.

Citazione:
Messaggio inserito da valderica

� un anticorpo secondario specifico per l'anticorpo che ha legato la proteina specifica per la sequenza di DNA(promotore)?

No non � il secondario � un anticorpo contro una proteina diversa!
Come ti dicevo:

Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

si immunoprecipita con un anticorpo e poi con un altro anticorpo in questo modo si possono studiare 2 proteine che sono legate alla stessa sequenza di DNA.

altrimenti immunoprecipeteresti sono 1 proteina, non potresti dimostrare che 2 proteine diverse (X e Y) sono legate alla stessa sequenza (a meno di non utilizzare poi altri metodi)

Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

si tratta anche per la re-ChIP di un controllo di quanto si ottiene nella ChIP?

No ovviamente non � un controllo e una tecnica che serve per uno scopo un po' diverso dalla semplice ChIP.
Non avrebbe molto senso fare tutte questa fatica per fare questa tecnica (che in pratica non � poi semplicissima) solo per avere un controllo positivo.

valderica
Nuovo Arrivato

Prov.: Avellino

36 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2010 : 13:18:05

...

infatti mi chiedevo:ma a che serve fare tutta sta fatica per fare un controllo?
ok!grazie!

grazie per aver fatto chiarezza.

ciao

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