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mo-lab
Utente Junior
Città: utrecht
348 Messaggi |
 Inserito il - 15 marzo 2010 : 14:15:16
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Ciao ragazzi!
Qualcuno di voi mi puo illuminare sulla tecnica dello Zn finger per indurre mutazioni?
GRazie!
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dallolio_gm
Moderatore
Prov.: Bo!
Città: Barcelona/Bologna
2445 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2010 : 16:48:52
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Non ne so molto, so solo che lo Zinc finger é un dominio proteico che lega una sequenza specifica di DNA (é presente in molti fattori di trascrizione) e che puó essere ingegnerizzato per riconoscere una sequenza specifica di un gene, 'bloccandone' l'accesso a altri fattori di trascrizione e in questo modo impedendone l'espressione.
E' un sistema molto piu' economico e rapido del knockout (devi ordinare il kit e ti risparmi di fare knockout su animali) e permette di inibire geni in specie in cui la ricombinazione omologa non funziona (non funziona il knockout) come Zebrafish. |
Il mio blog di bioinformatics (inglese): BioinfoBlog
Sono un po' lento a rispondere, posso tardare anche qualche giorno... ma abbiate fede! :-) |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2010 : 20:16:57
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Da noi si utilizzano le ZFN (zinc finger nuclease)
per fare gene targeting e gene disruption.
Non so se è quello che ti serve |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 18 marzo 2010 : 21:40:27
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mmm,questa tecnica è molto interessante
volevo chiedere se secondo voi è anche adattabile su altri modelli animli,che nn i soliti uomo/topo.
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"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
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dallolio_gm
Moderatore
Prov.: Bo!
Città: Barcelona/Bologna
2445 Messaggi |
Inserito il - 19 marzo 2010 : 10:13:32
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Io tutto quello che so viene da un articolo su The Scientist in cui si spiega la tecnica in un paragrafo.
Dice che la compagnia che lo ha ideato si chiama Sangamo Biosciences, il servizio si chiama CompoZr, e adesso viene fornito dalla Sigma:
- http://www.compozrzfn.com/
- http://www.sigmaaldrich.com/life-science/functional-genomics-and-rnai/zinc-finger-nuclease-technology/compozr-kit.html
In 6-8 settimane, pagando 25,000-35,000$, ti fanno arrivare un plasmide che codifica per la zinc-finger nuclease che taglia la sequenza di tuo interesse (é caro ma suppongo che lo sia meno del knock-out).
Qui nell'istituto dove lavoro, so di un gruppo che la utilizza per Zebrafish, un animale in cui non é possibile fare knock-out. |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 19 marzo 2010 : 13:05:14
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Confermo, si utilizza anche su ovociti di zebrafish.
Comunque sempre e solo in vitro o ex vivo.
Particolarmente interessante è il trial clinico che
sta avviando la Sangamo Biosciences, l'azienda che
detiene il primo brevetto sulle ZFN: in pratica
vogliono servirsi delle zinc per fare uno specifico
intervento di genome editing presso CCR5, il gene
la cui ablazione conferisce resistenza ad HIV. |
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mo-lab
Utente Junior
Città: utrecht
348 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2010 : 14:37:35
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| io lavoro cn zebrafish..mi serve per fare gene targeting |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2010 : 17:13:50
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Allora ti servono due cDNA sintetici, codificanti per una zinc
finger nucleasi destra e una sinistra, disegnate in modo specifico
per il tuo locus d'interesse. Poi ti serve un costrutto "donor"
che contenga i due flanking homology arms a monte e valle della
cassetta interna che vuoi targettare nel locus d'interesse.
Devi ovviamente rivolgerti a delle companies, come quelle sopracitate. |
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mo-lab
Utente Junior
Città: utrecht
348 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2010 : 18:35:26
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| grz |
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Discussione |
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Zn finger tecnology
Didattica
