Scusate la domanda che può essere banale.. ma studiando la purificazione di proteine di fusione mi sono trovato davanti l'uso di due tag: le GST e la coda di istidine.
Nel confronto fra questi due tag un fattore che emergeva era che: [i[esistono proteasi sito speficiche per rimuovere sia la GST che la coda di His, ma mentre devo sempre rimuovere la GST, la coda di His posso anche lasciarla..[/i]
La domanda che mi sorge spontanea e: perché?
Cioè.. A livello teorico non mi mutano entrambe la struttura della mia proteina quindi se poi devo caratterizzare la mia proteina la devo avere in condizioni native e quindi senza tag?
Certo, se vuoi fare una struttura la coda di istidine può darti fastidio. Ma se vuoi saggiare l'attività biologica della proteina (ad esempio), puoi magari lasciare le His (che sono solo 6 amminoacidi), mentre la GST è una proteina da 20 KDa (mi pare) e può darti molto fastidio anche per l'attività biologica, quindi in linea di massima si toglie sempre. Spero di essere stato chiaro...