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 Purificazione - GST vs coda His
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Cybexking
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3 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2010 : 10:16:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cybexking Invia a Cybexking un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusate la domanda che può essere banale.. ma studiando la purificazione di proteine di fusione mi sono trovato davanti l'uso di due tag: le GST e la coda di istidine.

Nel confronto fra questi due tag un fattore che emergeva era che:
[i[esistono proteasi sito speficiche per rimuovere sia la GST che la coda di His, ma mentre devo sempre rimuovere la GST, la coda di His posso anche lasciarla..[/i]

La domanda che mi sorge spontanea e: perché?

Cioè.. A livello teorico non mi mutano entrambe la struttura della mia proteina quindi se poi devo caratterizzare la mia proteina la devo avere in condizioni native e quindi senza tag?

Grazie in anticipo ;-)

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2010 : 16:10:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Certo, se vuoi fare una struttura la coda di istidine può darti fastidio.
Ma se vuoi saggiare l'attività biologica della proteina (ad esempio), puoi magari lasciare le His (che sono solo 6 amminoacidi), mentre la GST è una proteina da 20 KDa (mi pare) e può darti molto fastidio anche per l'attività biologica, quindi in linea di massima si toglie sempre.
Spero di essere stato chiaro...

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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Cybexking
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2010 : 18:01:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cybexking Invia a Cybexking un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille.. dubio chiarito.. in effetti non avevo pensato alla dimensione della GST vs quella della coda di istidine

grazie mille
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