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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
 Inserito il - 08 aprile 2010 : 11:35:28
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Ciao a tutti,
mi servirebbe un protocollo di estrazione del DNA a partire da colture primarie di linfociti umani. Potete aiutarmi?
Grazie a tutti.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 aprile 2010 : 12:32:57
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Beh puoi utilizzare un qualunque protocollo di estrazione di DNA.
Basta che pelletti le cellule le lavi con PBS e poi lisi il pellet.
Puoi anche utilizzare uno dei protocolli di estrazione da sangue saltando il passaggio di lisi dei globuli rossi.
Qua ad es. trovi un'infinità di protocolli: http://www.protocol-online.org/prot/Molecular_Biology/DNA/DNA_Extraction___Purification/index.html
Io ne ho qualcuno, ma credo che lì tu possa trovare quello che preferisci.
(poi magari se sono meno pigra ne metto anche qualcuno nella sezione protocolli  ) |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 08 aprile 2010 : 12:56:28
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Devo partire necessariamente da linfociti isolati, perchè facendo un unico isolamento, oltre ad estrarre il DNA, devo preparare campioni per un altro esperimento. Avevo già consultato il sito che hai linkato ma non ho trovato niente che mi soddisfi, anche perchè normalmente liso i linfociti tramite sonicazione. Grazie per avermelo segnalato comunque.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 aprile 2010 : 13:07:45
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Scusa ma non ho capito quale sia il problema...
tu hai i tuoi linfociti in coltura giusto?
Li prendi, li centrifughi, lavi il pellet con PBS ricentrifughi e togli il surnatante e poi inizi l'estrazione.
Ti ho detto che puoi utilizzare anche i protocolli di estrazione da sangue perchè io l'ho fatto da cellule in coltura, semplicemente al tuo pellet aggiungi la soluzione di lisi dei globuli bianchi (va bene anche per altre cellule) e procedi con il protocollo.
Altrimenti ne puoi utilizzare uno qualsiasi di quelli per colture cellulari.
Se sei abituata a lisarli per sonicazione puoi anche fare così, li lisi in un pochino di soluzione (o in PBS, dipende come sei abituata) poi aggiungi la soluzione e continui col protocollo.
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 08 aprile 2010 : 13:10:23
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Tutto chiaro, grazie
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Protocollo di estrazione del DNA
Didattica e Relazioni
