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patty82
Nuovo Arrivato
31 Messaggi |
 Inserito il - 08 aprile 2010 : 14:37:30
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Ciao ragazzi mi sono appena iscritta al vostro bellissimo sito....avrei bisogno di un aiuto: dovrei estrarre del DNA da sangue intero, o meglio in realtà quando mi arriva la provetta del prelievo, aliquoto il plasma e poi i buffy coat, ma mi rimangono sempre un bel po' di globuli rossi insieme ai bianchi....quindi ho bene pensato (almeno spero) che vada trattato come sangue intero. Ho provato con il DNAzol, ma non riesco ad estrarre niente. Credo che il problema sia dato dal fatto che parto da poche cellule e il DNAzol non è il metodo migliore per estrarre il DNA da così poche cellule (da protocollo si richiede di avere almeno 10.000.000 di cellule di partenza, che io non credo di avere. Sapete consigliarmi un metodo più appropriato oppure un kit adatto per estrarre il DNA in queste condizioni?
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
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beppe.cib
Nuovo Arrivato
41 Messaggi |
Inserito il - 08 aprile 2010 : 17:23:02
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| Funziona anche su sangue intero congelato? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 aprile 2010 : 17:32:39
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| Si beppe funziona anche su sangue congelato, come ti ho risposto anche nella tua discussione (il protocollo l'ho inserito dopo averti risposto, ma è sempre quello) |
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patty82
Nuovo Arrivato
31 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2010 : 10:27:37
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Grzie mille per il suggerimento...proverò!!!
Due domande:
- secondo te quel protocollo funziona anche su quantità molto più besse di sangue (per esempio partire da 0,2 al ma 0,4 ml)?
- il DNAzol non funziona perchè parto con una quantità di cellule troppo bassa? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 aprile 2010 : 11:29:06
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In effetti il volume che hai è un po' pochino, il metodo è consigliato per 1-10ml di sangue intero, non ho mai provato ad utilizzarlo per volumi inferiori.
Altrimenti puoi vedere altre discussioni del forum (ce ne sono varie) o vedere tra gli altri protocolli che ti ho indicato.
Il DNAzol non l'ho mai utilizzato, potrebbe anche darsi che il problema sia la quantità. |
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beppe.cib
Nuovo Arrivato
41 Messaggi |
Inserito il - 22 aprile 2010 : 11:41:04
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Due domande
1. Il tuo protocollo va bene anche con un volume di sangue iniziale compreso tra 1 e 2ml
2. la ricetta della Protein Precipitation Solution
Grazie
ciao |
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beppe.cib
Nuovo Arrivato
41 Messaggi |
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Estrazione DNA da sangue intero
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