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kiiuli
Nuovo Arrivato

biohazard
Prov.: pv
Città: Pavia


7 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2010 : 01:15:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiiuli Invia a kiiuli un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti!
sono alle prese con una mini tesina sul test ELISA per l'esame di immunologia..premetto che non conosco per niente questa tecnica (l'ho vista fare solo unavolta di sfuggita..)ma da varie ricerche che ho fatto ho capito che di test ELISA ce ne sono di vari tipi..volevo sapere: ma il test diretto e indiretto sono la stessa cosa di competitivo e non competitivo? nel caso quali sono le differenze? qualcuno mi saprebbe indicare un sito dove trovare informazioni attendibili?
ringrazio anticipatamente!
ciaoo

cidsmoke
Utente Junior



534 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2010 : 10:50:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cidsmoke Invia a cidsmoke un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Vediamo se mi ricordo un pò queste cose che ho fatto un tempo fa..
ELISA diretto:
Adeso alle pareti del micropozzetto ho l'antigene,quindi aggiungo il siero da testare,se è presente l'anticorpo(Ab)specifico per l'antigene(Ag)questo si legherà.Lavo il tutto(così da eliminare l'Ab che non si è legato)e aggiungo un Ab anti-Ig che si andrà a legare al precedente anticorpo del siero del paziente.ci siamo?La particolarità di questo anticorpo è che è marcato con un enzima(di solito la perossidasi)che è in grado di generare(con l'aggiunta di un opportuno substrato)colore!
Ricapitolando:
Se il siero del paziente contiene l'Ab allora l'Ab anti-Ig che mi fornisce il kit si legherà e avrò colorazione(reazione positiva!!)
Se il siero del paziente invece non contiene l'Ab,l'Ab anti-IG non si lega e non avrò colorazione(reazione negativa!!)
Per quanto riguarda l'ELISA indiretto è più o meno uguale solo che non cerco l'Ab del paziente,bensì l'Ag(ad esempio HbsAG dell'epatite)e quindi adeso alle pareti del micropozzetto avrò l'Ab specifico per quell'antigene!Quindi per rilevare la presenza dell'Ag aggiungo un secondo Ab che formerà un "sandwich"con il primo!
Una cosa così(fai conto sia il pozzetto)
Ab adeso----Ag nel siero??-----secondo Ab marcato con perossidasi!

Spero di essere stato chiaro..per spiegazioni sono qui!!
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kiiuli
Nuovo Arrivato

biohazard

Prov.: pv
Città: Pavia


7 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2010 : 11:40:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiiuli Invia a kiiuli un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille...quindi deduco che diretto-indiretto e competitivo-non competitivo siano la stessa cosa no? perchè ad esempio su wikipedia c'è scritto che il metodo diretto e indiretto sono due tipologie diverse di test non competitivo...ma questa distinzione l'ho trovata solo li e mi ha messo qualche dubbio sulla sua veridicità!
grazie ancora
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cidsmoke
Utente Junior



534 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2010 : 14:21:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cidsmoke Invia a cidsmoke un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No il competitivo è un'altra cosa!
Nel competitivo sulla piastra e attaccato l'antigene,e per far svolgere la reazione aggiungo contemporaneamente sia il siero del paziente(che forse contiene l'Ab)e l'anticorpo fornito dal kit!Per cui i 2 anticorpi COMPETONO per lo stesso sito di legame(l'antigene adeso).Ovviamente solo l'Ab del kit avrà l'enzima coniugato!
A questo punto con uno spettrofotometro si confronta l'intensità della colorazione dopo aver effettuato i lavaggi.
Risultato:
Più nel siero del paziente sarà presente l'Ab meno ci sarà colorazione!
Per cui sarà positivo.E viceversa!
Ciao!
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kiiuli
Nuovo Arrivato

biohazard

Prov.: pv
Città: Pavia


7 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2010 : 17:18:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiiuli Invia a kiiuli un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille!ho capito tutto!!!
non è difficile come test ma non avendolo mai fatto non sapevo neanche da che parte cominciare..
grazie mille!
speriamo vada tutto bene!
ciao
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