estrazione RNA da Brain cortex di topo

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miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 20 maggio 2010 : 13:14:49

salve a tutti
e' da un po che manco dal forum....
ops
:)

sto iniziando un nuovo progetto
e ho bisogno di estrarre RNA solo dalla corteccia celebrale di topo (brain cortex)

ma come faccio ad isolare solo la corteccia????
avete dei suggerimenti?

il mio capo mi ha detto che potrei
1) rimuovere il cervello dal topo
2) raffreddarlo in PBS freddo in ghiaccio
3) usare una apparato che somiglia a una grata come quella che tagli le uova a fette (scusate so non so come si chiama in italiano ma sto in un lab inglese) per tagliare il cervello in fette grandi
4) tagliare il cortex della fetta

la tecnica e' stata usata per proteine
ma il mio dubbio e'

se non congelo il cervello ma solo lo raffreddo a 4 gradi
il mio RNA sopravvive????

avevo pensato di raffreddarlo in RNA Later ma comuque otterei che la parte centrale del cervello non viene raggiunta dal RNA later
ma forse visto che voglio solo il cortex, e' sufficiente

avete esperienza?
o articoli da suggerire?
non riesco a trovare nulla di interessante in letteratura

grazie mille

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 20 maggio 2010 : 18:21:36

Io ho isolato le varie parti del cervello per l'RNA, in realt� avevo un collega molto bravo che lo faceva

esistono manuali e filmati che fanno vedere le varie parti del cervello e come si isolano (al momento non ho file, dovrei cercarli) la corteccia non � poi tanto difficile essendo esterna.
Comunque devi lavorare a freddo e velocemente, il trucco � quello, isoli la parte che ti interessa, banalmente anche con un bisturi e congeli subito, o metti subito in RNA-later.
Lavori con PBS freddo e in ghiaccio.

miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2010 : 12:02:12

ciaooo
grazie... faro' tutto in pbs freddo e seguo il protocollo che suggerisce il mio lab con bisturi finale
solo per sapere se e' giusto
prelevano il cervello del topo
lo freddano immergendolo in PBS freddo
e poi lo tagliano

ti suona familiare?

ma se
se trovi i file o i filmanti
mi puoi fare il favore di mandarmeli?
io nn riesco a trovarli

so l'anatomia del cervello

ma non ho mai estratto RNA solo da una parte