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ales
Utente Junior
Prov.: Palermo
Città: Palermo
455 Messaggi |
 Inserito il - 26 maggio 2010 : 10:44:33
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Ciao a tutti! devo passare le cellule da una fiasca in 4 con una diluizione 1:10, volevo saxe se metto 2ml di tripsina x staccare le cellule, metterò 2ml/10= 0,2ml di cellule? per avere una diluizione 1:10 quanto terreno devo mettere in ogni fiaschetta? spero in un aiuto 
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Ales |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 10:54:33
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allora... ti dico come faccio io... perchè mi sa che è tutto un po' a discrezione dell'operatore.
Innanzitutto, la quantità di tripsina dipende dal numero di cellule e se la splittata la fai con la fiasca a confluenza, dipende da quanto è grande la fiasca. Per esempio: Fiasca da 75 cm -> 4 ml di tripsina. A questo punto, quando le cellule si staccano, metti altrettanto terreno. Quindi 4 ml di terreno. Prelevi così tutte le cellule (in tutto avrai 8 ml di "roba") e centrifughi.
Dopo la centrifugata avrai il pellettone di cellule sul fondo della provettina. Butti via tutto il terreno. A questo punto parte il vero e proprio "spli".
Devi fare uno a 4?
puoi mettere 4 ml di terreno x risospendere il pellet di cellule e poi nelle nuove fiasche mettere 1 ml di cellule risospese. Oppure risospendi in 8 ml e prelevi 2 ml da aggiungere nelle nuove fiasche eccet.
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ales
Utente Junior
Prov.: Palermo
Città: Palermo
455 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 11:27:38
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| grazie kristanko x la tua risp :-) , volevo sapere, siccome io le cellule non le centrifugo ma le risemino con la tripsina, una volta staccate, dato che la diluizione è 1:10, metto 0,2ml di cellule + tripsina in 10 ml di terreno? |
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ales
Utente Junior
Prov.: Palermo
Città: Palermo
455 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 11:30:36
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| cmq le fiasche sono abbastanza piccole, credo che siano da 25 cm2 |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 12:41:24
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sinceramente non ho capito benebeneben come fai tu..... se inserisci qualche dettaglio magari ci arrivo... scusa la deficienza.. |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 12:49:07
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Un attimo solo: se devi fare una diluizione 1:10 se metti 0,2 ml di cellule+tripsina devi mettere 9,8 ml di terreno fresco. Il fatto di non centrifugarle non ti permette di sostituire utto il terreno di coltura, per cui io mi chiedo perchè non effettuare quel semplice passaggio. E' una semplice curiosità la mia...
L'esempio che ti ha fatto kristanko non fa una piega, sinceramente non capiso i tuoi dubbi.
Un'altra cosa: se vuoi fare una diluizione 1:10 allora devi riseminare le cellule non in 4 ma in 10 fiasche, credo.
Dacci qualche altra informazione per venirti incontro.
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ales
Utente Junior
Prov.: Palermo
Città: Palermo
455 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 13:05:55
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scusate ragazzi se non sono stata chiara, è che ho seguito alcune istruzioni che mi hanno dato essendo alle prime esperienze con le colture, e non so il motivo per cui non le centrifughiamo.
allora i passaggi sono questi: tolgo tutto il terreno, PBS e le stacco con tripsina metto ad incubare e vedo se si sono staccate, prendo 4fiasche e metto in ognuna 10 ml o 9,8 di terreno e semino in ognuna 0,2ml di cellule con la tripsina che avevo staccato prima.
ora mi chiedo: se il fattore di diluizione è 1:10 vuol dire che le devo seminare in 10 fiaschette?grazie ancora e chiedetemi se non sono stata chiara |
Ales |
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kristanko
Utente Junior
Città: Bologna
123 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 13:12:20
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all'inizio avevi detto che da una fiasca dovevi ottenerne 4. Con diluizione 1:10 ... Evidentemente quello che t'avanza lo butti.
Questo "tuo" metodo si faceva anche nel mio laboratorio dello stage per la tesi... Lo fai per risparmiare terreno, mi sa... |
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ales
Utente Junior
Prov.: Palermo
Città: Palermo
455 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 13:15:39
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come all'inizio da una fiasca ne devo ottenere 4, ma non so se è giusto a questo punto.. |
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ales
Utente Junior
Prov.: Palermo
Città: Palermo
455 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2010 : 13:17:00
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| cmq è strano che vogliano risparmiare terreno proprio con me, perchè tutti gli altri ragazzi centrifugano.. |
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colture cellulari
Didattica e Relazioni
