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MissTetè
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 05 giugno 2010 : 22:57:25
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per piacere mi potete aiutare??? oltre al metodo enzimatico che altri metodi esistono per calcolare la glicemia ?Devo fare una relazione sul dosaggio del glucosio nel sangue, abbiano fatto l'esperimento in laboratorio con metodo enzimatico ( glucosio ossidasi).
solo che non ho trovato nè su internet nè sul libro una bella spiegazione di questo metodo...compresa la tecnica spettroscopica.
In particolare potete dirmi come posso spiegare bene le reazione
test enzimatico:
Glucosio + O2 + H2O = gluconato + H2O2 (enzima: GOD)
2H2O2 + 4-aminofenazone + fenolo = 4-(p-benzochinone-monoimino)-fenazone + 4 H2O
insomma ditemi quello che sapete o consigliatemi un sito!
grazie!!!
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cidsmoke
Utente Junior
534 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2010 : 09:56:20
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Ciao!La chimica clinica è una parte dei miei studi che mi ha sempre interessato,quindi ti rispondo volentieri!
Il metodo da te sopra descritto prevede l'ossidazione del glucosio da parte dell'enzima glucoso ossidasi,con sviluppo di acido gluconico(gluconato)e perossido d'idrogeno,quest'ultima in presenza di un accettore cromogenico e in presenza dell'enzima perossidasi ossida l'accettore.Quali sono questi accettori?
o-anisidina,o-dianisidina,o-toluidina(però questi non si usano più!)
Oggi si usano fenolo accoppiato con 4-aminofenazone!
Altri metodi enzimatici sono:
-METODO ALL'ESOCHINASI-GLUCOSIO-6-fosfato DEIDROGENASI
Glucosio + ATP = glucosio-6 fosfato +ADP
Glucosio-6-fosfato + NADP = 6-fosfogluconato + NADH + H
Quindi il metodo comporta l'uso accoppiato della reazione enzimatica con esochinasi e poi con glucosio-6-fosfato deidrogenasi.
Quindi si misura l'incremento di assorbanza a 340nm(UV)!
Infine abbiamo altri metodi che però appartengono alla preistoria:
-METODI DI OSSIDORIDUZIONE
sono basati sulle proprietà riducenti del glucosio,legati alla presenza del gruppo aldeidico(medoti molto scadenti perchè nel plasma venivano dosati anche altri composti..insomma erano poco specifici!
-METODI COLORIMETRICI PER CONDENSAZIONE CON AMINE AROMATICHE
il glucosio,in ambiente condensante(acido acetico a caldo)danno luogo alla formazione di cromogeni verdi.L'amina più frequentemente impiegata era l'o-toluidina.
La reazione era discreta ma il reattivo era molto volatile e dell'odore sgradevole!
Spero di essere stato utile!Ciao!! |
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MissTetè
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2010 : 11:11:37
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sì grazie, ma sai dirmi qualcosa di più specifico rugardo al metodo con 4-aminofenazone ??
ciao! |
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cidsmoke
Utente Junior
534 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2010 : 12:37:16
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| Su un libro che ho a casa potrei elencarti le concentrazioni dei reagenti e delle soluzioni,ma non credo ti servirebbe a molto.. |
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MissTetè
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2010 : 23:12:48
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| no infatti....grazie cmq!!! |
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AmOeNuS
Nuovo Arrivato
19 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2010 : 18:25:19
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Citazione:
Messaggio inserito da cidsmoke
Altri metodi enzimatici sono:
-METODO ALL'ESOCHINASI-GLUCOSIO-6-fosfato DEIDROGENASI
Glucosio + ATP = glucosio-6 fosfato +ADP
Glucosio-6-fosfato + NADP = 6-fosfogluconato + NADH + H
Quindi il metodo comporta l'uso accoppiato della reazione enzimatica con esochinasi e poi con glucosio-6-fosfato deidrogenasi.
Quindi si misura l'incremento di assorbanza a 340nm(UV)!
Qualcuno sa spiegarmi proprio questo passaggio?
L'incremento di assorbanza, rispetto a cosa?
Ma soprattutto, qual'è il composto che assorbe a 340nm? Il NADH, giusto?
Se questo fosse vero, vorrebbe dire che, dopo aver effettuato queste due reazioni, la concentrazione di NADH equivale a quella del glucosio. E' corretto? |
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cidsmoke
Utente Junior
534 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2010 : 19:17:55
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Vuol dire che lo spettrofotometro legge l'assorbanza a 340 nm ogni 20 sec ed infine(dopo circa 5 min) rivela l'assorbanza finale..questa è correlata alla concentrazione di glucosio!
Spero di essere stato utile! |
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AmOeNuS
Nuovo Arrivato
19 Messaggi |
Inserito il - 08 luglio 2010 : 01:09:25
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| si si ok! questo lo avevo intuito.. volevo una conferma del fatto che l'assorbanza che leggiamo è quella del NADH! E che quindi è una determinazione della concentrazione del glucosio indiretta |
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cidsmoke
Utente Junior
534 Messaggi |
Inserito il - 08 luglio 2010 : 14:10:10
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E' quella del NADH! |
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dosaggio enzimatico glucosio
Didattica e Relazioni
