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Autore

Discussione

reiko
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 25 luglio 2006 : 13:00:03

aiuuutooo!!!
c'� qualcuno sulla faccia di questa terra che sappia come si f� la pre-inclusione/l'inclusione per preparare i vetrini per l'immunoistochimica?!
rispondeteeeeee!!!qui rischiamo di non laurearci pi�!!!!
thanks!!!
thanks!!!!
(in questo momento ci stiamo prostrando sul pavimento!!)

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 25 luglio 2006 : 19:43:58

La preinclusione? Io l'ho sempre chiamata inclusione e basta!
Comunque in generare ci sono 2 tipi di inclusione, per tessuti congelati e per tessuti fissati.

Per i tessuti congelati si utilizza una resina in genere OCT, noi usiamo questo protocollo:
- preparare una vaschetta di metallo contenente ghiaccio secco e acetone
- riporre all'interno una vaschetta pi� piccola con Isopentano
- aspettare che si rafferddi il tutto (si forma la brina alle pareti)
- riempire un cryomold (piccola vaschettina di plastica apposita) con OCT
- mettere il tessuto da congelare nel cryomold e ricoprirlo di OCT
- Appoggiare il cryomold su un supporto e appoggiarlo sulla superficie dell'isopentano nella vaschetta interna (l'isopentano non deve andare sopra la tessuto!)
- quando l'OCT si � congelato immergere in isopentano per 10min
- congelare subito a -20 o -80

Per il fissato invece si include in paraffina:
noi usiamo questo protocollo:
1. FISSAZIONE del tessuto in FORMALINA 1 notte
2. DISIDRATAZIONE
- 1h in alcol al 70%
- 1h in alcol al 80%
- 45min in alcol al 100%
- ancora 45min in alcol al 100% (cambiare l'alcol)
- 1h in BIOCLEAR (o XILENE)
3. IMPREGNAZIONE in PARAFFINA
- 1h in una vaschetta con paraffina
- o.n. in un'altra vaschetta con paraffina
4. INCLUSIONE
- versare un po' di paraffina liquida nel mold
- mettere il tessuto nel mold
- versare altra paraffina liquida
- far raffreddare (su piastra fredda)

A questo punto in entrambi i casi si procede al taglio, per i tessuti in OCT si usa in Criostato, mentre per quelli in paraffina il microtomo.

Spero ti basti, fammi sapere se hai bisogno altre informazioni!

Ciao ciao

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 25 luglio 2006 : 23:56:12

Io per il cervello faccio anche tagli senza inclusione.

Es. fresh frozen:
metti il tessuto su un pezzettino di stagnola appoggiato sul ghiaccio secco, poi quando � congelato (tempo 1 minuto ma anche meno) lo puoi passare nel -80 o/n.
Poi metti una goccia di OCT sulla base del criostato, ci appoggi sopra il tessuto e cominci ad affettare.

Oppure il nostro microtomo ha la base raffreddata, quindi noi teniamo il tessuto (dall'animale perfuso con 4% PF) a 4 gradi prima in PF 4% per 1-2 ore, poi in 30% glicerolo o/n. A questo punto lo mettiamo sul microtomo che lo porta a -20 e cominciamo a tagliare.

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