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domi84
Moderatore

Smile3D
Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 13 luglio 2010 : 19:44:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho fatto fin'ora degli esperimenti di Co-Immunoprecipitazione su proteine trasfettate.
Ho usato un Lysis Buffer con Triton 1% finora. L'immunoprecipitato diretto della proteina non viene benissimo (ad occhio legherà il 10% della proteina espressa in grosse quantità), ma in compenso la Co-immunoprecipitazione delle proteine che interagiscono con questa viene benissimo.
Ora sono passato a fare la Co-IP su la proteina endogena. Con questo buffer non riesco proprio ad immunoprecipitare la proteina (che si vede di per se a malapena nei totali). Ho provato ad usare il Ripa Buffer e l'IP diretto della proteina endogena viene benissimo, ma non si vede alcun interattore, come se la Co-IP non avvenisse proprio.
Qualcuno conosce qualche altro buffer per la Co-IP?
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

paolo865
Utente Junior


Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco


262 Messaggi
Inserito il - 13 luglio 2010 : 20:50:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di paolo865 Invia a paolo865 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io uso al posto del triton l'NP40 allo 0.07% oppure l'NLS allo 0.06%
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 14 luglio 2010 : 00:59:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
NP40 allo 0,07% al posto del Triton, ma quindi con 10% glicerolo?
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paolo865
Utente Junior


Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco


262 Messaggi
Inserito il - 14 luglio 2010 : 08:05:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di paolo865 Invia a paolo865 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
no, usi solo il detergente diverso...io con il triton avevo una condizione troppo stringente e non immunoprecipitavo bene...il glicerolo non l'ho mai usato
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 14 luglio 2010 : 09:33:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ah, un'altra cosa, cos'è questo NLS?
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