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falci83
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 15 luglio 2010 : 20:12:21

Ciao a tutti, sono nuova del forum e alle primissime armi nel lavoro e all'univ mi hanno chiesto da studentessa di presentare un laboratorio agli studenti del primo anno. Spero di avere aiuto da voi perch� mi hanno chiesto di fare cose che non ho mai fatto.

Ho uno stock di primer Forward e Reverse (sepratai) a 400 micromolari e devo utilizzare i miei primer a una concentrazione di 20 micromolari.

Ora la mia domanda, molto sciocca �:
Qual � la formula per diluire i primer, in questo caso? e li diluisco con h2o sterile?

Scusate per la banalit�.

Grazie!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 16 luglio 2010 : 00:33:23

La formula � sempre la stessa per tutte le diluizioni: Vi x Ci = Vf x Cf

devi semplicemente passare da 400 a 20, quindi quante volte diluisci? Ovvero quante volte 20 sta in 400?

Qua trovi tutti i conti che ti possono servire in laboratorio:
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/concentrazioni.asp
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/diluizioni.asp

Poi quel "devo utilizzare i miei primer a una concentrazione di 20 micromolari." a cosa si riferisce?
Letta cos� sembra che sia la concentrazione finale che devi usare nella PCR, nel qual caso la diluiresti nella mix di PCR assieme a tutto il resto e all'acqua.
Per� visto che 20 micromolare per una PCR � una tonnellata di primer immagino che sia una diluizione che fai dallo stock e poi usi questa diluizione da mettere nella mix (avrebbe pi� senso come quantit�), in questo caso s� li diluisci in acqua sterile.