Esperimento con E.coli plasmide pGLO e gene GTF

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Chimere, cloni e geni
Nicole Le Douarin

La sesta estinzione. La vita sulla Terra e il futuro del genere umano
Richard Leakey, Roger Lewin

Ologenesi
Daniele Rosa

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

Esperimento con E.coli plasmide pGLO e gene GTF

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Indie
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 18 luglio 2010 : 20:34:39

Salve, ho un problema.
Nell'esperimento di trasformazione batterica con plasmide pGLO e subclonaggio di un deleto del gene GFP non riesco a capire perch� piastrando i batteri competenti(verdi fluorescenti) ne crescono molti di pi� che piastrando batteri ligati (bianchi).
Le piastre sono trattate con ampicillina e arabinosio.

So' che potrebbero mancare dei dati importanti ma da quel che ho capito dovrebbe essere un esperimento d'esempio abbastanza comune.

Indie
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2010 : 16:38:26

Forse non mi sono spiegato in modo chiaro.

Come risultato del mio esperimento ho una piastra divisa in due, in una parte ho delle colonie bianche che rappresentano l'efficienza di ligazione. Nella seconda parte ho molte pi� colonie verdi fluorescenti(la fluorenza la da il gene GFP) che rappresentano la competenza.
Quello che non mi � chiaro � il perch� di questa differenza di quantit� di colonie, in entrambi i casi abbiamo una piastra con arabinosio e ampicillina, ed entrambe le colonie hanno il plasmide GLO che danno la resistenza all'ampicillina, �'unica differenza � un colore diverso e una quantit� minore delle colonie bianche ma perch�?
Forse non mi � chiara la differenza tra competenza, trasformazione ed efficienza di ligazione che da quanto ho capito �:
Competenza: vettore+frammento(ligato al vettore) nel batterio
Eff. di ligazione:percentuale di vettore+frammento(ligato al vettore)
Trasformazione: fase in cui vettore, vettore+frammento, frammento vengono "fatti" entrare nel batterio

Indie
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2010 : 16:50:18

aggiungo la spiegazione dell'esperimento che per� non spiega la differenza di numero tra le colonie bianche e verdi

http://www.tecnicoagrarioeboli.it/html/ogm.html

SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2010 : 18:35:31

Non sar� semplicemente che hai meno vettore ligato? Pu� essere che il tuo clonaggio non sia stato cos� efficiente e quindi hai "pochi" vettori con il gene deleto. Pochi vettori ergo poche colonie di batteri trasformati

Discussione

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Vai a:

MolecularLab.it

Android e Mobile



Scarica le app! Ora anche sul tuo smartphone!

Ciao Login - Iscriviti



Visitatori: 166

Novità
Link scientifici: divisi in categoria in una directory scientifica, link utili e d'approfondimento.