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ohsorbole
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: Bologna
15 Messaggi |
 Inserito il - 22 luglio 2010 : 16:01:27
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Sto impazzendo perché non riesco più a ottenere amplificati.
Avendo quasi finito la vecchia confezione di Taq (+ buffer con MgCl2 e nucleotidi) ne ho ordinata un'altra alla stessa ditta. Ho provato ad amplificare nel solito modo, solita proporzione di reagenti e solito ciclo, e non viene nulla. Per controllo ho provato anche con genomici vecchi, che con la vecchia Taq avevano dato buoni amplificati. Nulla di nulla, compaiono solo i primer dimer.
Ho quindi provato ad amplificare un paio di campioni nuovi con la vecchia Taq, di cui mi era rimasto un microlitro scarso, e sono venuti bene.
Ho pensato allora che fosse un problema della Taq (era arrivata non proprio freddissima, con i "panetti" di ghiaccio sciolti, anche se ancora frescolini) e ho chiesto alla ditta come potevo fare. Me ne hanno mandato un'altra confezione (anche questa arrivata non freddissima). Niente, non funziona neppure con questa.
Che cosa fareste voi a questo punto? Dite che è colpa del kit o è più probabile che sia qualche altro problema? Mi stanno venendo un sacco di dubbi assurdi. Non so più che cosa pensare.
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H2O
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
 Inserito il - 22 luglio 2010 : 16:32:09
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| Ciao...Sembrerà una banalità ma controlla la data di scadenza della mastermix. Che ditta te la fornisce? Ti arriva in dry ice? |
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ohsorbole
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: Bologna
15 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2010 : 16:39:10
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La mix la faccio io a partire dai reagenti forniti con la Taq, a cui aggiungo i miei primer e il genomico. Sulle provette fornite non mi pare ci sia una data di scadenza.
La ditta è la Genespin. I prodotti non sono spediti in ghiaccio secco, ma con sacchetti congelabili (che prima ho chiamato panetti di ghiaccio, non so come si chiamano esattamente).
Silvia
P.S:scusate, prima non avevo firmato. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2010 : 18:23:54
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Da quanto non ti funziona?
Da questo mese con il caldo atroce?
Se la risposta è sì il mio consiglio spassionato è: chiudi tutto vai in ferie e riprovaci a settembre! Lo so può sembrare una cosa stupida, ma è così le PCR d'estate hanno problemi a venire, sono in molti a dirlo! Io ci ho sbattuto la testa un anno le ho provate tutte, ho cambiato reagenti, pipette, termociclatore... persino laboratorio e ... niente! A settembre è tornato tutto alla normalità. Poi parlando con amici non sono l'unica a cui sia successo.
P.S. Non c'è bisogno di firmarsi a ogni messaggio, però se vuoi puoi inserire la tua firma dal tuo profilo o anche presentarti nella discussione apposita: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=462
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ohsorbole
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: Bologna
15 Messaggi |
Inserito il - 23 luglio 2010 : 10:26:21
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Ma i miei colleghi, con reagenti di un'altra ditta, non stanno avendo problemi. Il laboratorio e i termociclatori sono gli stessi per tutti.
E' vero, a volte in laboratorio tutto comincia ad andare storto senza nessun motivo apparente (potrei raccontarvi della misteriosa sindrome delle trasformazioni fallimentari che ha colpito tutti i gruppi di ricerca contemporaneamente un paio di anni fa, anche se usavamo cellule e protocolli diversi, che si è poi risolta all'improvviso come per miracolo).
Purtroppo sono dati che ci occorrono presto perché ci interessa il risultato, dobbiamo anche comunicarlo ad altre persone. Altrimenti sarei ben contenta di dimenticarmene per un po'! Adesso stiamo ordinando i reagenti Promega, quelli che usano i nostri colleghi. Incrociamo le dita!
Grazie.
Silvia |
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ohsorbole
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: Bologna
15 Messaggi |
Inserito il - 23 luglio 2010 : 10:30:46
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Ah, ho dimenticato di rispondere alla domanda: sì, è da questo mese, da due o tre settimane. (Mamma mia, forse il problema non sono i reagenti, sono i miei neuroni surriscaldati, in questo periodo sto perdendo un sacco di colpi... ). |
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La PCR mi abbandona!
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