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Robiol
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 27 luglio 2010 : 11:32:42
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Ciao a tutti! Mi sono appena iscritta a questo forum che trovo molto interessante ed è un ottimo aiuto per andare avanti nella ricerca. Ho raccolto diverse nozioni relative la trasfezione che dovrò iniziare a fare tra qualche settimana, ma ahimè...non so da dove iniziare!!! Sicuramente ho intenzione di utilizzare un metodo fisico con la Lipofectamina (GIBCO) il cui protocollo sembra abbastanza semplice; ma il mio problema è questo: dove ricavarmi il DNA per trasfettare??
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
 Inserito il - 27 luglio 2010 : 11:38:05
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Citazione:
Messaggio inserito da Robiol
ma il mio problema è questo: dove ricavarmi il DNA per trasfettare??
scusa, ma come fai a programmare una trasfezione senza DNA??? non hai il costrutto?
ps: la lipo è invitrogen... |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Robiol
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 11:48:36
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| Per il momento non ho nulla..sto valutando cosa utilizzare e mi sembra che il reagente migliore sia la lipofectamina (si gibco, invitrogen è uguale). Devo trasfettare per far esprimere alle cellule determinati recettori, perchè non esiste una linea cellulare che esprima "contemporaneamente" tutti quelli che mi servono. O meglio esiste già pronta, ma costa tantissimo. |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 12:12:21
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necessariamente hai bisogno del plasmide. secondo me dovresti interessarti prima di tutto a trovare il costrutto e poi al protocollo di trasfezione. tra l'altro non è detto che la lipo sia quella più adatta alle tue cellule. esistono molti altri trasfettanti, se li hai a disposizione, o puoi farti dare dei comapioni omaggio, dovresti testarli per vedere quale è meno tossico e quale ti trasfetta a % maggiore.
Io personalmente non ho mai fatto un costrutto dall'inizio, non credo sia una cosa smeplice e rapida (cioè, potresti impiegarci mesi!). io li ho sempre chiesti, se non li abbiamo nella library, agli autori dei paper che usavano i costrutti che mi interessavano. sei conosci qcn che usa questi costrutti puoi scrivergli.
tra le altre cose, leggendo la tua risposta, mi pare di capire che tu vuoi trasfettare le cellule per avere un'espressione stabile, non transiente, giusto? |
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Robiol
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 12:18:32
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Esatto, trasfezione stabile. Grazie per la tua risposta!! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 12:24:18
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se devi fare una trsfezione stabile le cosa si complicano molto. devi clonare l'inserto in un vettore specifico, da lì la trasfezione e infine la selezione dei cloni stabili. questo detto in soldoni. nel mio lab da circa un anno lavorano per avere un clone stabile...io farei un pensierino sulle cellule già pronte...
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Robiol
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 12:27:52
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| Immagino. Le cellule già pronte costano non poco anche perchè servirebbero più linee...per il momento continuo a cercare..grazie mille! |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 12:29:18
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| Oppure ti procuri un costrutto lenti o retrovirale... |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2010 : 12:29:53
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Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos
Oppure ti procuri un costrutto lenti o retrovirale...
oppure sì! |
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northenstar
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
91 Messaggi |
Inserito il - 07 agosto 2010 : 11:44:21
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Ciao a tutti! visto che qui si parla di trasfezione approfitto per chiedere...
Perchè nella trasfezione cn lipofectamina si lavora in mezzo privo di siero? grazie a chi risponderà! baci |
Studiando Biologia Molecolare con Matusalemme....
"Bisogna avere in sé il caos per partorire una stella che danzi." nietzsche |
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Discussione |
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trasfezione cellule con lipofectamina
Didattica
