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Discussione |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
 Inserito il - 18 agosto 2010 : 14:17:34
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ciao a tutti! qualcuno di voi ha mai isolato epatociti umani da biopsia? avreste un protocollo da suggerirmi?
grazie mille!
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 18 agosto 2010 : 19:31:42
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| epatociti umani o di ratto? noi lavoriamo su uomo |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 19 agosto 2010 : 11:07:34
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epatociti umani....anche io lavoro su uomo |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 19 agosto 2010 : 11:10:36
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mi puoi aiutare?
grazie |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 01 settembre 2010 : 21:31:17
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scusate se mi infilo nella discussione...ma ankio lavoro con epatociti umani e sarei interessata a un protocollo!
baci |
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support_biomatica_it
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
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michy2
Nuovo Arrivato
44 Messaggi |
Inserito il - 28 settembre 2010 : 14:39:11
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| grazie!!!!!!!!!!!! |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 04 ottobre 2010 : 00:02:03
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scusate tutti, questo è quello che usiamo noi
1.Perfondere il tessuto epatico con HBSS senza calcio e magnesio a 37°C per eliminare il sangue presente nel campione.
2.Perfondere il tessuto con una soluzione enzimatica, portata a 37°C, composta da William’s E medium con calcio e magnesio, 0.4 mg/ml di liberasi e 0.12 mg/ml di DNAsi in modo da ottenere una parziale digestione della matrice cellulare.
3.Incubare il tessuto parzialmente digerito e sminuzzato nella soluzione enzimatica a 37°C per 20-30 minuti.
4.Recuperare la soluzione enzimatica contenente le cellule dissociate dal tessuto.
5.Terminare in maniera meccanica la dissociazione del tessuto non digerito(ad esempio mediante lo stantuffo di una siringa) e risopendere le cellule ottenute in William’s E medium.
6.Riunire questa sospensione cellulare con la soluzione enzimatica precedentemente recuperata.
7.Filtrare la sospensione cellulare per eliminare i frammenti di tessuto non digeriti.
8.Centrifugare per 5 minuti a 650 rpm la sospensione cellulare filtrata, tenere il surnatante e risospendere il pellet cellulare.
9.Centrifugare nuovamente la sospensione cellulare a 650 rpm per 5 minuti, tenere il surnatante e risospendere il pellet cellulare composto da epatociti (piastrare gli epatociti in flask coattate con collagene I e coltivarli con apposito medium)
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Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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Discussione |
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protocollo isolamento epatociti
Didattica e Relazioni
Hepatocyte isolation protocol.pdf
