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Vanilla Sky
Utente Junior
204 Messaggi |
 Inserito il - 03 settembre 2010 : 10:18:45
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Ciao ragazzi,
devo fare la separazione e conta di PBMC da sangue periferico: ho letto il protocollo, ma non mi è chiaro un punto..perciò chiedo il vostro aiuto!
Sinteticamente devo (scrivo le tappe principali fin dove sorge il mio dubbio): diluire il sangue venoso con soluzione fisiologica, stratificare con Fycoll Hypaque,centrifugare, raccogliere l'anello di cellule mononucleate, eliminare eventuali residui di Fycoll/siero e ricentrigugare, risospendere i PBMC in terreno e aggiungere il lisante...ecco è quest'ultimo passaggio che non mi torna.. come mai lo devo aggiungere?
Grazie 1000!!!
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 03 settembre 2010 : 11:45:48
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Ciao
il "lisante" (che potrebbe essere anche semplicemente acqua distillata)
serve semplicemente per distruggere i globuli rossi contaminanti l'anello.
Per quanto tu proceda in modo corretto e preciso, un minimo di contaminazione
è inevitabile, perchè i globuli rossi sono molto adesivi. Purtroppo sono così
abbondanti da falsare enormemente la tua conta, per cui è sempre opportuno
liberarsene sempre prima di fare una conta.
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Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 04 settembre 2010 : 11:39:54
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Io faccio così: dopo aver prelevato l'anello lavo le cellule con PBS. Dopo 3 lavaggi allontano il PBS, aggiungo il lisante (io uso NH4Cl), lascio in incubazione sotto cappa per 10 minuti, centrifugo e allontani il surnatante, poi risospendo in terreno e conto.
Per ulteriori informazioni non esitare a chidere
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Vanilla Sky
Utente Junior
204 Messaggi |
Inserito il - 04 settembre 2010 : 17:15:48
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Grazie 1000!! |
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Separazione e conta PBMC
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