bande centrali western piu chiare

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GFAP
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 02 ottobre 2010 : 00:53:00

Salve a tutti,

da un po di tempo mi vengono dei western che hanno le bande al centro piu chiare. Carico lo stesso campione in 12 pozzetti (ovviamente stesso volume) e uso la tubulina. Dovrebbero venirmi allo sviluppo bande tutte uguali (sia alla vista che con il densitometro) ma invece i pozzetti centrali (5 6 7 8vo campione di solito) vengono nettamente piu chiari quasi non fossero trasferiti o l'anticorpo non si fosse legato bene. Qualcuno ha avuto lo stesso problema? come lo ha risolto?
Ho pensato fosse il trasferimento (uso invitrogen Xcell II) oppure l'incubazione, ma cambiando queste variabili non e cambiato il risultato.

Grazie

ale88n
Nuovo Arrivato

Prov.: rm
Citt�: roma

51 Messaggi

Inserito il - 08 ottobre 2010 : 20:19:09

sicuramente il trasferimento e l'incubazione non centra nulla, io faccio un wester a settimana e non ho mai avuto problemi, forse la colpa � del gel, cio� della sua concentrzione.

superilala
Nuovo Arrivato

Citt�: Rotterdam

30 Messaggi

Inserito il - 21 ottobre 2010 : 17:18:11

Mai avuto problemi coi WB??...ammazza che c%lo!!! :-D

Cmq non potrebbe essere che la banda la vedi pi� chiara perch� � sovraesposta?

claudy
Nuovo Arrivato

49 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2010 : 23:59:12

se fai il dosaggio per caricare la stessa quantit� � abbastanza strano...