rompere le cellule senza sonicatore

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lisosomix
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 07 ottobre 2010 : 11:35:51

ciao a tutti mi sono iscritta oggi!!!
ho un quesito da proporvi, � possibile rompere le cellule del sangue solo con cicli di congelameto e scongelamento (ho a disposizione al max un congelatore a -60�C) e Triton x100.
io devo poter fare un dosaggio enzimatico di un enzima lisosomiale.
non ho nessun aiuto meccanico a disposizione (non ci sono sonicatori, omogeneizzatori..niente di niente)
grazie mille per chi sapr� darmi un aiuto!!
lisosomix

Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 07 ottobre 2010 : 16:12:54

beh, sicuramente gli sbalzi termici e il triton dovrebbero fare il loro lavoro...magari ti posso consigliare di fare anke 40min in ghiaccio mettendo sul pellet un ugual volume di lysisbuffer(Ripa + inibitori delle proteasi).

in ogni caso senza sonicare non riesci a rompere la cromatina, e questo pu� darti fastidio...magari per ottenere il tuo enzima, dopo la lisi fai una IP.

Baci

lisosomix
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2010 : 09:15:12

grazie daria85!!
avevo pensato anch'io al Ripabuffer, ma avevo paura di perdere troppo materiale, e poi di avere interferenze con la fluorescenza..cmq potrebbe essere un'alternativa..
grazie ancora fra