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Autore

Discussione

_pietro_
Nuovo Arrivato

Citt�: Lund

104 Messaggi

Inserito il - 08 ottobre 2010 : 14:55:39

Ciao a tutti,

vi martello per l'ennesima volta su western e dintorni.

Io uso un sample buffer (di estrazione) con questa ricetta:
0,0625M Tris-HCl
2% SDS
10% Glicerolo

Il mio loading buffer e':
1ml sample Buffer
30uL Blu di bromofenolo 0,4%

Ma se usassi buffer di estrazione diversi (come ad esempio semplicemente cambiando detergente, oppure CHAPS buffer, NP-40 buffer,RIPA, i diversi buffer di frazionamento ecc.) posso usare il mio loading buffer originale o devo farne su misura per gli altri buffer?

Mi fa un po' senso pensare di correre una elettroforesi con campioni estratti in CHAPS buffer e mescolargli un loading buffer preparato sulla base di un'altro.

Se sono riuscito ad essere chiaro (

), cose ne pensate?

gilthanas
Nuovo Arrivato

100 Messaggi

Inserito il - 09 ottobre 2010 : 13:10:10

tranquillo...
va benissimo cos�...
usa pure sempre il tuo sample buffer sempre diverso ed il tuo loading buffer semre lo stesso...

non � necessario prepararti il loading diverso...

in generale:
1) tu estrai le tue proteine con il buffer che ritieni + opportuno
2) poi devi preparare i campioni prima di caricarli..se lavori in condizioni denaturanti in genere li scaldi a 95�C giusto? in genere noi il loading lo aggiungiamo a questo livello ed il buffer di lisi � sempre diverso...

tranquillo

_pietro_
Nuovo Arrivato

Citt�: Lund

104 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2010 : 12:39:27

Ricevuto.

Ma cosi', per amor di discussione, pensi che loading buffers su misura per ogni buffer di estrazione possano aiutare una migliore riuscita dell'elettroforesi ed eventualmente del blotting o e' un accortezza irrilevante?