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fideb
Nuovo Arrivato

DNA
Città: Potenza


54 Messaggi

Inserito il - 24 ottobre 2010 : 13:40:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fideb Invia a fideb un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!per procedere con esperimenti di Real Time utilizzando il metodo di quantificazione relativa (ddCt) ho valutato prima l'efficienza di amplificazione dei miei geni e del mio housekeeping...il risultato è che le efficienze non sono prossime al 100% ma sono intorno al 75-80% per tutti i geni (housekeeping compreso)...essendo paragonabili le efficienze ma non proprio prossime al 100% posso applicare il metodo relativo?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 04 novembre 2010 : 23:55:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa ci sono stati dei problemi con questo post, reinserisco la mia risposta andata persa:
Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

Beh il metodo del deltadeltaCt ha come "assunzioni" che le efficienze di gene target e hk siano "identiche" e che siano al 100% (altrimenti non potresti mettere quel "2").
Quindi per fare un calcolo corretto dovresti utilizzare un metodo che tenga conto delle relative efficienze, ad es.: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11328886

Tuttavia se le efficienze sono molto simili puoi comunque utilizzare il deltadeltaCt per fare un confronto, tenendo però presente che non sarà "correttissimo".

In realtà credo che la maggior parte delle persone lo faccia comunque senza farsi assolutamente alcun problema, mi fa piacere vedere che ci sia qualcuno che quanto meno si ponga il problema!

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fideb
Nuovo Arrivato

DNA

Città: Potenza


54 Messaggi

Inserito il - 13 novembre 2010 : 11:10:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fideb Invia a fideb un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie!!!! anche per l'articolo...
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