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Eppendorfina
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 12 novembre 2010 : 18:30:31
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Ciao a tutti ragazzi!
spero proprio che qualcuno sappia rispondere alla mia domanda!
Stamattina bella tranquilla inizio la mia purificazione, ma quando metto il mio estratto per fare la centrifuga: MI ESPLODE 20 MINUTI DOPO!aldilà del delirio di dover pulire tutto...il problema è: che è successo??
Una mia collega mi ha detto "i tubi nn devono mai essere pieni fino al loro limite ma circa il 20-30% in meno!" Io ho tubi da 50ml,e fino a 50 ml in effetti li avevo riempiti! le centrifughe successive le ho fatte ha 25 ml ciascun tubo, 5gradi, 8000rpm per 40 min (come dovrei fare)...però adesso noto che il fondo tende a deformarsi quindi anzichè a punta le trovo sul tondenggiante! c'è chiaramente qualcosa che nn va ancora, ma nn riesco ancora a capire che cosa!
Aiutatemi vi prego!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 12 novembre 2010 : 18:34:21
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| Se stai parlando di ultracentrifuga ci vogliono tubi fatti apposta (credo abbiano le pareti più spesse) altrimenti... boom! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 18:36:05
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Ma in che senso sono esplose?
Si sono crepate le provette?
Succede con le provette scadenti, se non è buona la plastica non resistono alla centrifuga!
Pensa che a noi è successo con tuorlo d'uovo e fenolo, non ti dico che puzza la centrifuga!!! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 18:48:53
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
vado un attimo OT: che diavolo fate in lab con tuorlo d'uovo e fenolo??
Un ottimo zabaione!!!
No comunque, a parte il fatto che ho sbagliato a scrivere ed è cloroformio e non fenolo (deformazione professionale da estrazione di DNA con fenolo/cloroformio!  ), serve per estrarre le IgY dalle uova --> purificazione di anticorpi prodotti in gallina. |
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Eppendorfina
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 19:06:43
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bah, in teoria sono tubi già testati!anche la mia collega li usa, non con la stessa velocità effettivamente...!
e per esplodere intendo: che le pareti si sono crepate e puuuuuuuffff!!!non è stata una bella visione...sig!
Forse dovrei usare le falcon con la punta protetta...non so come spiegarvele, hanno la base attorno alla punta! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 19:22:10
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Citazione:
Messaggio inserito da Eppendorfina
Forse dovrei usare le falcon con la punta protetta...non so come spiegarvele, hanno la base attorno alla punta!
No, quelle servono solo per far stare in piedi da sola la provetta, ma di solito hanno un brutto vizio... non entrano in centrifuga! Quindi credo che siano inutili, a meno che tu non sia sicura che nella tua ci entrino.
In ogni caso quello che devo controllare è la forza massima a cui possono essere sottoposte le falcon che hai, quindi devi guardare a che forze le centrifughi, quindi i "g" non gli "rpm"! Se non resistono ne devi comprare di più resistenti, non vedo altre soluzioni. |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 20:16:27
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altrimenti guarda se puoi abbassare un po' la velocita' della centrifuga (coerentemente con quello che devi fare).
A me successe la stessa cosa con le falcon da 15ml, durante precipitazione di DNA (midi prep). La volta successiva ho abbassato la velocità (tipo da circa 15000 a 9000) e non ho avuto + problemi. Quanto alla resa del DNA precipitato non credo che la diminuzione di velocità influisca + di tanto (su untempo di 30 minuti almeno).Mediamente precipito 8-9 ug/ul di plasmide. Alternativamente si possono usare tubi di vetro (che personalmente trovo scomodissimi).
Ora non so cosa tu stia facendo, se estrai DNA o altro... forse questi suggerimenti possono esserti lo stesso di aiuto. |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 21:27:29
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io facevo delle ultracentrifughe per purificare il proteasoma da 3ore a 50.000giri e usavo dei tubi appositi che infatti non andavano mai buttati, ma puliti ogni volta con candeggina e alcol x riutilizzarli.
inoltre mi ricordo che era molto importante che tutti i tubi fossero perfettamente dello stesso peso, infatti ogni tubo veniva pesato prima di essere caricato in centrifuga.
ciao |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2010 : 22:11:10
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| Eh sì, bisogna stare molto attenti alle ultracentrifughe, soprattutto a quelle velocità. Se il rotore è sbilanciato possono essere davvero dolori... |
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Eppendorfina
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 13 novembre 2010 : 18:14:43
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| Io sto separando degli oleosomi vegetali...come ha detto GPina controllerò se la forza è compatibile con quelle falcon!Sfortunatamente, già la velocità che uso è poca rispetto al protocollo che ho, che prevederebbe 300000rpm, infatti ho allungato i tempi, uff! |
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centrifuga e tubi che esplodono!
Didattica e Relazioni
