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laboratorio
Nuovo Arrivato

12 Messaggi

Inserito il - 23 novembre 2010 : 21:38:53

Caio a tutti,
volevo chiedervi una curiosit�. ho fatto una real time pcr con i geni costituitivi b-actina e gus al cDNA di campioni HPV e non sono venuti. Ho riprovato ed ho fatto 18s RNA ed � venuto con cicli soglia pure bassi (24-25). Qualcuno sa spiegarmi perch� gli altri 2 non sono venuti??
Grazie

Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 24 novembre 2010 : 11:47:26

forse un problema di primer o di condizioni ( T. annealing, Mg...)

ciao

gilthanas
Nuovo Arrivato

100 Messaggi

Inserito il - 27 novembre 2010 : 15:22:52

quoto la risposta di Daria85...aggiungerei che 24-25 non � proprio un segnale di cicli soglia bassi..si intende cicli soglia bassi se escono fuori almeno un 10 cicli prima (15-16)...
probabilmente � un problema di messa a punto della PCR...magari prova prima a fare una PCR normale per testare i primers. A meno che non usi questi primers di routine ed in genere funzionano bene...I quel caso si tratta di un altro problema..