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markino3
Nuovo Arrivato
26 Messaggi |
 Inserito il - 24 novembre 2010 : 14:43:33
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Ciao a tutti, ho estratto il DNA totale da batteri (probiotici) e ho fatto un gel di agarosio allo 0.8% per verificare l'esito dell'estrazione. Terminata la corsa il marker è corso correttamente, mentre i miei campioni sono rimasti particamente nei pozzetti. Essi tuttavia si vedono molto bene al transilluminatore, c'è anche una visibile differenza tra i campioni che contengono diverse quantità di estratto, sapete dirmi allora come mai non si sono mossi?
Grazie in anticipo!
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2010 : 19:34:39
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| domanda : hai linearizzato il DNA?o l hai caricato superavvolto? |
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markino3
Nuovo Arrivato
26 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2010 : 20:58:38
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| Dopo l'estrazione l'ho direttamente caricato su gel, ho fatto la stessa cosa altre volte (estrazione da lievito e non da batteri), e in quei casi le bande avevavo corso, poco ma la corsa era avvenuta evidente. |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2010 : 21:22:50
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lo chiedevo xkè il DNA superavvolto migra + velocemente di quello lineare... e nel DNA batterico(quindi procariotico) il superavvolgimento è normale, mentre per il lievito che è eucariotico no...
ciao |
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mak_steon
Utente Junior
138 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2010 : 08:25:14
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| Che estrazione hai fatto? |
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markino3
Nuovo Arrivato
26 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2010 : 09:05:17
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| Ho seguito il protocollo dell'Istituto Superiore di Sanità, praticamente l'estrazione viene effettuata mediante trattamento termico, senza l'utilizzo di enzimi o altre sostanze esterne. Sono quindi cosciente che il campione caricato era molto sporco, però un minimo si migrazione me la sarei aspettata. |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2010 : 10:37:14
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| domanda... parli di DNA totale, intendi il cromosomico? se é integro, ti rimane come una banda che migra molto alta, anche al di sopra degli stessi marker. Prova a diminuire la conc. del gel |
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