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Autore Discussione  

Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 24 settembre 2006 : 13:47:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi..qualkuno mi può dare un protocollo x strippare la nitro? Grazie mille.
Farah

valeriamassa
Nuovo Arrivato


Prov.: Milano
Città: milano


64 Messaggi
Inserito il - 24 settembre 2006 : 14:07:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valeriamassa  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valeriamassa Invia a valeriamassa un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Marianna!
Il protocollo per strippare la nitro posso dartelo domani, quando torno in lab, per ora ti dico che devi mettere la tua nitro dentro una scatola di plastica (tipo quella dei puntali vuota) in cui hai versato la soluzione di stripping (la cui composizione ti darò domani),il tutto chiuso e messo nel bagnetto a 50 gradi in agitazione,facendo attenzione che l'acqua del bagnetto non entri nella tua scatola ma la lambisca solamente, il tutto per 50 minuti. La soluzione di stripping si ricicla, quindi scaduti i 50 minuti prendi la scatola con la tua nitro, togli la soluzione, la sciacqui 2 volte con acqua bidistillata (sempre lasciandola nella scatola) e poi le versi sopra TBS tween 0,1% per mezz'ora.Poi passi al quenching in latte 5% per un'ora e incubi col primario. Spero di esserti stata utile, a domani
Vale
valeria
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 24 settembre 2006 : 16:11:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sei stata preziosa...aspetto con ansia il protocollo! Grazie mille.
Farah
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valeriamassa
Nuovo Arrivato


Prov.: Milano
Città: milano


64 Messaggi
Inserito il - 24 settembre 2006 : 17:17:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di valeriamassa  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di valeriamassa Invia a valeriamassa un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao! Ho trovato on line la ricetta della soluzione di stripping, domani la confronto con la mia e ti faccio sapere:
2% SDS
65.5 mM Tris-HCl, pH 6.8
100 mM ß-Mercaptoethanol
Fammi sapere!
valeria
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 25 settembre 2006 : 06:41:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io usavo una composizione lievemente diversa

Per 50ml

3.12 ml HCl 1M (finale 62.5 mM)
6.25 µl ß-mercaptoetanolo
10 ml SDS 10% (che quindi risulta al 2%)
36.9 ml H2O

Altri usano:

0.2M glicina, pH 2.5
0.05% Tween 20


Ho anche aggiunto il protocollo nella sezione protocolli.
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=27
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 26 settembre 2006 : 08:49:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille a tutti ! Se ne avete altre testate da voi sono ben accette!!
Farah
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