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Barbaryna
Nuovo Arrivato
47 Messaggi |
 Inserito il - 19 dicembre 2010 : 17:06:52
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ciao di nuovo a tutti!!!altra domanda...il cloruro di calcio serve a rendere le cellule competenti per la trasformazione per quale motivo??può essere considerato un chelante??
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2010 : 18:40:40
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ciao barbaryna. Sali come il cloruro di calcio o cloruro di rubidio alterano la permeabilità della membrana (o delle membrane) di E. coli facilitando il passaggio del DNA. Non mi ero mai interessato del meccanismo prima di questa domanda :), cmq girando su internet ho trovato un potenziale modello: Theory
Since E. coli is not naturally transformable, the ability to take up DNA or competency must be induced by chemical methods using divalent and multivalent cations (calcium, magnesium, manganese, rubidium, or hexamine cobalt) (9, 14). Alteration in the permeability of the membranes allows DNA to cross the cell envelope of E. coli which is composed of an outer membrane, an inner membrane, and a cell wall. The outer membrane of E. coli can be understood by application of the fluid mosaic model for membranes and is composed of phospholipids, proteins, and lipopolysaccharides. Many channels or zones of adhesions are formed by the fusion of the outer membrane and the inner membrane through the cell wall layer. Although the transformation mechanism is not known, previous studies indicate that these channels allow for the transport of DNA molecules across the cell membrane (3, 15). The negative charges of the incoming DNA, however, are repelled by the negatively charged portions of the macromolecules on the bacterium’s outer surface. The addition of CaCl2 serves to neutralize the unfavorable interactions between the DNA and the polyanions of the outer layer. The DNA and competent cells are further incubated on ice for thirty minutes to stabilize the lipid membrane and allow for increased interactions between calcium ions and the negative components of the cell. The reaction mixture is then exposed to a brief period of heat-shock at 42oC. The change in temperature alters the fluidity of the semi-crystalline membrane state achieved at 0oC thus allowing the DNA molecule to enter the cell through the zone of adhesion (for animation go to http://www.dnai.org/text/mediashowcase/index2.html?id=1009).
In parole povere i canali attraverso cui passa il DNA sono carichi negativamente, cosi' come il DNA. Quindi si "respingono" a vicenda e il transito del DNA non e' favorito. Il Calcio neutralizza le cariche negative permettendo il passaggio degli acidi nucleici.
Non so se questo modello corrisponda al vero...
A questo indirizzo trovi altre info
http://www.microbelibrary.org/index.php/component/resource/laboratory-test/3152-transformation-of-escherichia-coli-made-competent-by-calcium-chloride-protocol
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Barbaryna
Nuovo Arrivato
47 Messaggi |
Inserito il - 20 dicembre 2010 : 11:03:55
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| Ciao!!!sei stato gentilissimo!!! |
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mar90
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 25 ottobre 2012 : 19:41:43
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| Perchè si usa il calcio e non il rubidio? |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 26 ottobre 2012 : 18:41:37
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Puo' essere una parziale risposta?
"Il rubidio reagisce violentemente con l'acqua e può provocare incendi. Per garantirne la sicurezza e la stabilità, deve essere conservato immerso in olio minerale, sotto vuoto o in atmosfera inerte." WIKI |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Cloruro di calcio e cellule competenti
Didattica
