| Autore |
Discussione |
|
|
todo84
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 11 gennaio 2011 : 21:32:42
|
Ciao a tutti...sono nuova del forum..e avrei bisogno di aiuto..da un po' di tempo nel nostro laboratorio stiamo avendo problemi con la coltura cellulare di monociti.il fatto è semplice..il terreno che utilizziamo, RPMI-1640, vira di colore (tende al fucsia) dopo solo 1 ora dalla piastratura, compromettendo cosi la vitalità cellulare!! abbiamo provato di ogni..cambiato lotto e ditta del terreno, cambiato gli antibiotici/antimicotici, e persino cambiato o tolto il tampone (usiamo l'Hepes). Abbiamo provato a cambiare anche tutta la plasticheria (falcon, flasche, piastre..)L'incubatore è nuovissimo (cambiato da poco!!) e la CO2 è stabile al 5%. Se qualcuno ha avuto lo stesso problema e sa come risoverlo o almeno suggerisce che cosa provare d'altro per capire..scriva pure!!!ogni ripsosta è ben gradita!!!
Grazie mille!
|
|
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
 Inserito il - 11 gennaio 2011 : 22:29:46
|
a me sembra proprio mancanza di CO2. cosa dice la bombola?
prova a mettere mezzo senza cellule nel tuo incubatore e controlla il colore dopo un po' e prova a mettere le colture in un incubatore di un lab vicino. |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
 |
|
|
todo84
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 11 gennaio 2011 : 23:11:40
|
..la bombola è a posto..già controllato..e il terreno vira anche senza cellule!!!.. ...ti viene in mente altro??...grazie mille davvero cmq!!! |
|
|
|
domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 11 gennaio 2011 : 23:40:03
|
| La CO2 è stabile perchè lo dice l'incubatore? è tarato? Esiste uno strumento per misurare la CO2 negli incubatori (non so come si chiama), forse dovreste provare... |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 12 gennaio 2011 : 10:39:27
|
| esatto, quello che intendevo dire te lo ha spiegato meglio domi84. metti terreno con e senza cellule anche in un altro incubatore. |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
todo84
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 12 gennaio 2011 : 14:01:42
|
..vira anche in un altro incubatore.....  |
|
|
|
Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 12 gennaio 2011 : 16:56:05
|
| il viraggio è dovuto ad un cambio del pH del mezzo, il colore è dato dal Phenol Red Sodium Salt. Quindi se mai il tampone lo dovete aggiungere non diminuire. Provate a anche ad aumentare o cambiare lotto del siero o a piastrare meno cellule |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 gennaio 2011 : 17:57:28
|
Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Prendi del terreno senza siero, senza cellule, insomma senza aggiungerci nulla. Vira anche così?
Citazione:
Messaggio inserito da todo84
..la bombola è a posto..già controllato..e il terreno vira anche senza cellule!!!.....ti viene in mente altro??...grazie mille davvero cmq!!!
Se vira anche senza cellule il problema è del terreno. L'incubatore lo escluderei visto che hai provato anche un altro incubatore.
Concordo con Martin.diagnostica, il viraggio è dato da un cambiamento del pH, misura il pH prima e poi fai delle prove con il terreno senza cellule con o senza i vari componenti (siero, antibiotici...) e rimisura il pH per vedere cosa ti dà problemi.
Ideale comunque sarebbe anche assicurarsi che la CO2 sia realmente 5% negli incubatori che usi. |
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 12 gennaio 2011 : 21:15:12
|
prova anche così: metti un po' di mezzo in falcon e misura il pH. poi metti un po' di mezzo in altre due falcon, in una delle due aggiungi Hepes pH7.4 2mM e metti entrambi i falcon in incubatore. Dopo una decina di minuti misura il pH del mezzo con e senza hepes e controlla se ci sono stati cambiamenti.
ps: ovviamente le cellule ti muoiono, giusto? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 13 gennaio 2011 : 01:12:11
|
Oppure fatti prestare una bottiglia di RPMI da un altro laboratorio (già preparato ovviamente) e vedi se le cellule apprezzano!!!!
Posta esattamente il protocollo che esegui per preparare il siero e le linee cellulari che hai in cultura.
Una curiosità hai scomplementato il siero che aggiungi al mezzo
 |
|
|
| |
Discussione |
|
viraggio terreno RPMI : cause
Didattica e Relazioni
