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lamboboy90
Nuovo Arrivato



14 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2011 : 15:40:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lamboboy90 Invia a lamboboy90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi è urgente, ho l'esame di biologia molecolare martedì e non riesco a capire una cosa. Spero di spiegarmi a dovere.

Per creare un ricombinante omologo inserisco nelle cellule ES una cassetta di resistenza alla neomicina e a fianco una cassetta di sensibilità alla timidina chinasi. Per individuare i ricombinanti metto le cellule in un terreno di colture ricco in neomicina e successivamente le metto in un terreno con l'antivirale contro la timidina chinasi per individuare invece i ricombinanti omologhi e distinguerli dai ricombinanti non omologhi. E fin qui credo di aver capito. La mia domanda è questa: perché necessito di eseguire PCR e Southern Blotting (come ha detto il professore) per individuare i ricombinanti, se ho già fatto una procedura di selezione con neomicina e antivirale? non dovrei già distinguerle nella petri quando muoiono a causa della presenza dei due farmaci??

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2011 : 15:53:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per avere la conferma a livello molecolare della clonalità,
(almeno con il southern) e della stabilità del clone transgenico
in coltura (almeno per PCR), che non sono per niente scontate dal
momento in ci allievi la pressione di selezione da parte dei farmaci.
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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lamboboy90
Nuovo Arrivato



14 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2011 : 16:11:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lamboboy90 Invia a lamboboy90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
GRAZIE INFINITE!! altre risposte sono ben accette!!
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2011 : 16:41:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Tra l'altro dubito che la selezione per gancyclovir abbia un'efficienza
del 100% nell'eliminare le cellule TK-positive. All'inverso, è noto che
le cellule in adesione possono passarsi la TK via gap junction
quindi non è sempre ben netto il confine tra clone omologo e non.
Anche per questo la verifica molecolare è richiesta.
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

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