Ragazzi è urgente, ho l'esame di biologia molecolare martedì e non riesco a capire una cosa. Spero di spiegarmi a dovere.
Per creare un ricombinante omologo inserisco nelle cellule ES una cassetta di resistenza alla neomicina e a fianco una cassetta di sensibilità alla timidina chinasi. Per individuare i ricombinanti metto le cellule in un terreno di colture ricco in neomicina e successivamente le metto in un terreno con l'antivirale contro la timidina chinasi per individuare invece i ricombinanti omologhi e distinguerli dai ricombinanti non omologhi. E fin qui credo di aver capito. La mia domanda è questa: perché necessito di eseguire PCR e Southern Blotting (come ha detto il professore) per individuare i ricombinanti, se ho già fatto una procedura di selezione con neomicina e antivirale? non dovrei già distinguerle nella petri quando muoiono a causa della presenza dei due farmaci??