clonaggio non riuscito

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Il secolo del gene
Evelyn Keller Fox

La cellula
Geoffrey Cooper

Al cuore della vita. Il suicidio cellulare e la morte creatrice
Jean Claude Ameisen

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

clonaggio non riuscito

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Adriel
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 15:16:45

Ciao a tutti...sto scrivendo una relazione relativa alla ligazione e trasformazione di cellule di E.coli..in laboratorio il risultato non � stato ottimale in quanto nelle piastre non sono cresciute colonie, n� in quella di 1/10 n� in quella di 9/10...dovrei spiegarne la motivazione..quali potrebbero essere i motivi di questo insuccesso?

_ARY_
Nuovo Arrivato

Prov.: mi
Citt�: milano

81 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 15:37:39

ciao,anche a me � successo :(
la spiegazione potrebbe essere che il tuo vettore di clonaggio non � stato assunto da nessuna cellula batterica.
Nel vettore c'� un gene per la resistenza ad esmpio ampicillina,quindi per sapere se le cellule hanno il vettore le fai crescere in un terreno selettivo. A questo punto le cellule con il vettore crescono (perch� esprimono il gene della resistenza) le cellule senza vettore muoiono.
quindi, se non hai cellule significa che il tuo plasmide non � stato acquisito, magari durante la ligazione qualcosa � andato storto!

spero di esserti stata utile^^

Adriel
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 16:10:31

assolutamente s�!gentilissim davvero!!!!!! grazie!!!! :)

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1914 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 16:45:28

di che la ligasi non funzionava e prima di fare la trasformazioni accertati che la ligazione sia avvenuta facendo una PCR con 0,5 ul di reazione di ligazione usando un primier nell'inserto ed uno sul vettore