Ciao a tutti! Sono mesi che cerco di produrre una sonda ad RNA per effettuare un'ibridazione in situ. Il mio problema è che non riesco ad effettuare il clonaggio perchè si verificano due situazioni: o non crescono i batteri o quando crescono e comunque con resa bassa, la corsa su gel dopo PCR di controllo mi evidenzia solo bande con altezza più bassa dell'atteso. Qualcuno sa quale può essere il problema o come effetture una localizzazione in situ senza partire dal clonaggio? Grazie
Aggiorno: ho parlato con qualcuno del laboratorio e abbiamo deciso di diminuire la quantità di cDNA nel prodotto di ligazione e vediamo che succede domani. Può essere che ci sia troppo DNA?