cDNA: RT - PCR

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lamboboy90
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2011 : 15:30:48

Per vedere se un gene � espresso produco cDNA a partire da mRNA con la PCR. Ma la trascrittasi inversa non si denatura alle temperature cui � sottoposta nel termociclatore?
Magari ho sbagliato a capire la procedura, ma i conti non mi tornano...
Se mi aiutate vi dar� tutta la mia gratitudine ^^
Grazie mille!

0barra1
Utente Senior

Citt�: Paris, VII�me arrondissement

3847 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2011 : 15:43:25

L'RT serve soltanto per il passaggio iniziale di retrotrascrizione, una volta avvenuto ci� puoi far partire l'amplificazione con la DNA pol sul cDNA retrotrascritto. L'amplificazione non � basata mica sull'mRNA, ma appunto sul cDNA ottenuto.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

lamboboy90
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2011 : 15:49:46

Quindi in pratica, se voglio vedere se il mio gene � espresso prima di tutto eseguo la procedura per produrre il cDNA a partire dal mio trascritto. Se poi questo � prodotto verr� amplificato nel termociclatore, altrimenti no, evitandomi di fare il northern blotting.
Ho capito giusto ora?