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Kuradia
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
 Inserito il - 17 marzo 2011 : 16:48:36
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Ciao a tutti, avrei un dubbio da chiarire, mi aiutereste? Nel laboratorio dove sto svolgendo la tesi mi stanno insegnando a fare il western blot... ora, è successo che l'ho visto fare a due persone diverse che hanno fatto due cose opposte che mi hanno confuso le idee 
In particolare: durante la corsa elettroforetica dei campioni, in sds-page, mi è stato detto che quando vedo che i campioni hanno superato lo stacking gel e sono arrivati nel running gel, il voltaggio va cambiato...solo che una persona a cui l'ho visto fare l'ha portato da 200v a 140v (gel medio), l'altra persona a cui l'ho visto fare l'ha portato da 100v a 120v (mini gel)  ...chi sbaglia? Il voltaggio si aumenta o si diminuisce, e perchè?
Grazie in anticipo 
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2011 : 16:54:05
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| mmm io ho sempre fatto 100-120 ma altre persone facevano 120-140 non ho mai notato grosse differenze. Chiaramente parliamo in termini assoluti perché le dimensioni del gel di solito sono quelle standard della cameretta della biorad. |
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Kuradia
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2011 : 17:03:58
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mmh ok fin qui ok...xD il problema è che una persona lo aumentava(100->120) e l'altra lo diminuiva(200->140)...da quello che dici deduco che è corretto aumentarlo...sai spiegarmi il perchè? Grazie
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2011 : 18:37:26
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Ognuno fa a modo suo! C'è chi corre a volt costanti, chi a ampere costanti, chi aumenta durante la corsa, chi diminuisce...
L'importante è che:
- Il wb viene, quindi la proteina si vede
- il gel non si surriscaldi troppo
- una volta che hai settato un protocollo non lo cambi
Io per esempio corro a 30 mA costanti
(Nella mia testa lo faccio perchè il passaggio di corrente è indicato dagli ampere -> quindi il passaggio di corrente è costante -> quindi la corsa delle proteine è uniforme -> quindi le proteine corrono meglio :D, in realtà i gel corrono bene anche a V costante) |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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Kuradia
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2011 : 19:00:12
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| Grazie! Mmmh...però, pensavo, forse questa cosa di cambiare voltaggio si fa perchè la velocità di migrazione delle molecole è inversamente proporzioonale al voltaggio (mi pare) quindi magari nel running gel si aumenta, così le proteine si muovono più lentamente e si sepaarano meglio? Può essere? O ho sparato na cavolata immensa? XD |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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Kuradia
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2011 : 19:24:43
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| Grazie mille :D |
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impostare voltaggio nell' SDS-PAGE
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