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matteo989
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1 Messaggi

Inserito il - 07 aprile 2011 : 22:17:21

Salve, ho bisogno del vostro aiuto!!!!!!!!!!!!!!
In laboratorio abbiamo fatto la determinazione delle proteine con il metodo di bradford di un campione di latte, in seguito metto il procedimento dell'esperimento:
Preparazione del colorante
� Dililuire il reattivo di Bradford 1:5 (v/v; 100 in 400) con H2O

Costruzione della retta di taratura
1. Preparare 6 standard a concentrazione compresa fra 1,0 e 0,15 mg/mL diluendo la soluzione di BSA standard (32 mg/mL) in 5 mL di acqua secondo il seguente schema
2. Porre 5 mL di RB diluito in ogni provetta alla quale aggiungere 0,1 mL di campione di BSA. Per la preparazione del bianco aggiungere 0,1 mL di acqua
3. Agitare brevemente ed attendere circa 15 min.
4. Determinare l�abs a 595 nm

Determinazione contenuto proteico dei campioni
1. Diluire il latte in una opportuna quantit� di H2O sapendo che:
� La sensibilit� del saggio � compresa fra 1,0 e 0,1 mg/mL
� La concentrazione proteica media di proteine nel latte alimentare � pari a circa 3% (30 mg/mL)
Quantit� di H2O aggiunta per diluire il latte #61664;
2. Porre 5 mL di RB diluito in ogni provetta alla quale aggiungere una opportuna quantit� di latte diluito (��.mL)
3. Agitare brevemente ed attendere circa 15 min.
4. Determinare l�abs a 595 nm

il fatto � che fino alla retta di taratura e alla equazione ci sono arrivato, dopo di che sostituisco i valori abs del latte con x dell'equazione e cosi ottengo un valore K.
La cosa succesiva � moltiplicare K per il fattore di diluizione che non so come si fa calcolare!!!!!??????
il fatto infatti � che non so se bisohna considerare solo la diluizione h20 con il latte o anche del RB con il latte diluito????
cmq apparte questo se mi potete aiutare con questi fattori di diluizione!!!!GRAZIE