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biologina
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 12 aprile 2011 : 15:39:15

a cosa serve la lysis buffer solution??....
ovvimente dopo aggiungo proteasi K se questa distrugge le membrane cellulari la prima che fa????
sto parlando di campioni di sangue!!!!

theBiochemist
Nuovo Arrivato

Prov.: UK
Citt�: Leicester

14 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2011 : 11:00:21

Ciao.
le proteasi K non servono a distruggere la membrana, ma a digerire le proteine in essa contenute che 1) contaminerebbero il tuo DNA e 2) potrebbero degradarlo.
Il lysis buffer serve a distruggere la membrana. Generalmente contiene EDTA che serve a chelare i cationi necessari alle DNasi e denatura le proteine (normalmente tramite SDS, per E. coli). Infatti, le proteasi k non vengono denaturate dall'SDS e possono essere utilizzate nella stessa soluzione.

Nicola :)

biologina
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 19 aprile 2011 : 16:06:46

grazie nicola sei stato molto esauriente anche se ora ho un'altra domanda da porvi...
il protocollo che sto seguendo � quello delle Nucleospin.
La Buffer Blu ,la buffer 5 la buffer be sono utilizzate per i lavaggi ma cosa fanno esattamente che funzione svolgono??

picchiasebino
Nuovo Arrivato

Citt�: roma

52 Messaggi

Inserito il - 06 maggio 2011 : 14:16:26

Genaralmente sono lavaggi di purificazione dalle impurit� varie come cloruro di guanidina (o cloroformio x denaturazione e allontanamento proteine) ed etanolo.

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 20 maggio 2011 : 20:01:06

ovviamente se usi un kit i produttori eviteranno di dirti al 90% quello che c'� dentro al buffer!! meglio l'home made a volte!