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 Caratterizzare una proteina
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gbarutello
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10 Messaggi

Inserito il - 12 aprile 2011 : 18:52:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gbarutello Invia a gbarutello un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao..vorrei sapere se potete aiutarmi:
se č stato prodotto un Ab monoclonale per una certa proteina (esempio espressa in alcuni tumori) significa che chi ha prodotto il monoclonale conosce tutta la sequenza proteica? oppure non la conosce?
lo chiedo perchč c'č una domanda a cui non riesco a rispondere che chiede di spiegare come si potrebbe caratterizzare una prot e il gene codificante corrispondente avendo a disposizione un mAb che funziona in Western blot. per cui dovrei poartire dal presupposto che si conosca la proteina? non credo visto che la domanda chiede come fare per caratterizzarla! ma allora come č stato prodotto questo Ab se non conosco nulla della prot in questione???!
grazie! bye

Emiliano_Biotech
Nuovo Arrivato

Mad_scientist

Prov.: VR
Cittā: Verona


10 Messaggi

Inserito il - 12 aprile 2011 : 19:20:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Emiliano_Biotech Invia a Emiliano_Biotech un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
provo a risponderti:
per fare degli mAB devi immunizzare un animale per la proteina in questione, e dai linfociti B che ottieni fai l'ibridoma con cellule murine tumorali per ottenere la linea immortalizzata che ti produce un solo tipo di anticorpo. [un singolo clone B farā sempre lo stesso anticorpo].
A mio avviso non č detto che debba necessariamente conoscere l'intera sequenza proteica, dato che comunque gli Ab riconoscono alcuni motivi chiamati epitopi, e non sequenze a caso.

Io come soluzione proporrei una proteina di fusione con un epitopo noto, per un anticorpo monoclonale tranquillamente disponibile in commercio..in questo modo saresti in grado di purificarla, per poter cominciare delle analisi.

certo che per ottenere la proteina almeno la sequenza del gene la dovresti conoscere..o quantomeno avere una vaga idea delle sequenze fiancheggianti il gene, per poterlo isolare utilizzando degli enzimi di restrizione.

spero di non aver scritto troppe cavolate!
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