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singer87
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 22 aprile 2011 : 14:08:26
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Ciao a tutti!
Qualcuno sa spiegarmi la differenza tra la colorazione con il blu coomassie normale e quello colloidale per le proteine?
Grazie!
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2011 : 22:05:35
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Il Blu Coomassie R250 e il Blue Coomassie G250 (colloidale) differiscono chimicamente per la sola presenza di due gruppi metilici, presenti sulla molecola G250. Ciò non altera la tipologia di aa a cui i coloranti si legano, ossia residui aromatici e basici, in quanto l'aromaticità e le cariche negative portate in dote dai gruppi SO3- sono mantenuti.
Ciò che contraddistingue R250 da G250 è la diversa solubilità e affinità per la matrice del gel di poliacrilammide. Il secondo infatti è dotato di scarsa solubilità in una soluzione di acido fosforico e ammonio solfato, il che fa si che il Blue Coomassie G250 sciolto formi una dispersione colloidale. Esiste un equilibrio tra lo stato di colloide e quello disciolto, spostato nettamente verso sinistra, appunto. Tuttavia questo equilibrio è sufficiente a far si che sempre nuovo G250 entri in soluzione. Una volta in soluzione, però, a causa della sua insolubilità, la molecola può andare incontro soltanto a due destini: legarsi, con un'alta affinità in effetti, alle proteine per mezzo di interazioni di stacking e interazioni elettrostatiche, oppure tornare nello stato aggregato. Mancando di affinità per la struttura polimerica di acrilamide-bisacrilamide non può infatti interagire con la matrice porosa. Una volta che le proteine sono state saturate con il BC G250, nuove molecole non passano più in soluzione.
Al contrario il BC R250, sebbene abbia preferenza per le proteine, lega anche la matrice, il che rende necessari dei passaggi di decolorazione con una soluzione al 10% di ac. acetico in acqua, allungando le tempistiche di molto rispetto al G250.
In virtù della sua superiore affinità per le proteine, la colorazione con G250 si rivela più sensibile (sono visualizzabili bande di 30 ng, contro quelle di 100 ng della R250). Nonostante la colorazione con G250 non necessiti di decolorazione, a volte vengono comunque effettuati anche tre passaggi di colorazione/decolorazione in serie, aumentando quindi i tempi di lavoro, in quanto ciò permette di incrementare decisamente la sensibilità del metodo, sino a permettere di visualizzare bande di pochi ng. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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singer87
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 30 aprile 2011 : 17:27:37
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Grazie mille! Spiegazione molto esaudiente! Ora è tutto più chiaro!  |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 30 aprile 2011 : 17:30:56
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Prego, piacere di esser stato utile.
Buono studio  |
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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