estrazione rna cloruro di cesio

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cocchina
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15 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2011 : 19:42:36

ciao a tutti, vorrei esporvi il mio problema e confrontarci se è possibile!
da sempre nel mio lab si utilizza il gradiente di cloruro di cesio per estrarre RNA da cellule umane in colture o da linfociti estratti con il ficoll.
la resa dei linfociti è sempre inferiore a quelle delle cellule in coltura pur partendo dallo stesso numero di cellule. penso che questo dipenda dalle dimensioni della cellula. ad ogni modo in questi giorni ho ripetuto un estrazione da linfociti (5*10(6))che sono stati precedentemente congelati (non so per quanto tempo).dopo la verifica su gel gli RNA sono frammentati (no smear)
il congelamento può avere influito?
inoltre dopo la risospensione in acqua io sono solita favorirla incubandoli a 37°C con leggera agitazione per 30 minuti (questa volta 1 ora)
può avere influito?
grazie