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Crick82
Utente Junior

139 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2006 : 14:21:05

Ad un seminario ho sentito parlare di una tecnica che permette di rilevare le proteine direttamente sul gel senza il trasferimento su mebrana. Non si tratta della colorazione del gel con Coomassie infatti ho sentito che utilizzano Anticorpi primari e secondari direttamente sul gel senza effettuare il trasferimento su membrana. Sapete dirmi qualcosa in pi�?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2006 : 16:16:37

Ah si io avevo provato un paio di anni fa a farlo utilizzando un kit (mi sembra della Pierce, ma non ci giurerei!), ma i risultati sono stati molto deludenti e ho rinunciato subito!
La sensibilit� (anche dichiarato dal kit) era molto inferiore rispetto alla membrana e quindi andava bene solo per proteine molto espresse!
All'epoca era appena uscito e non era ancora molto affidabile, magari adesso le cose sono migliorate!
se guardi il sito della pierce
(questo � il link: http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=01041115)
ti dicono che � stato migliorato... mah???

Esistono anche kit per visualizzare direttamante su gel proteine His-taggeg.
Beh io avevo provato un "fantastico" reagente dell'Invitrogen che non � funzionato per niente... non solo sulle mie proteine ma neanche sul loro standard fatto apposta! Inoltre dicevano che dopo aver utilizzato il reagente potevi comunque blottare il gel...
l'ho fatto ma non si � blottato niente!!! Ho colorato il gel con comassie (dopo il blot) e le proteine erano ancora l�!!!
Ho chiamato il servizio tecnico, mi hanno detto che mi avrebbero fatto contattare dal loro servizio tecnico in scozia, dopo un po' di mesi e ripetute sollecitazioni mi hanno finalmente telefonato... ho cercato di rispiegare il problema ma la linea era disturbatissima quindi mi hanno detto che mi avrebbero contattato per e-mail...

passa altro tempo e mi arriva una mail dove era riportato pari pari il "troubleshooting" del manualetto del kit che avevo gi� e che avevo gi� provato da sola per cercare di risolvere il problema

sempre pi� arrabbiata ho richiamato e mi hanno risposto che avrei potuto chiedere la restituzione del prodotto e il rimborso... ma ormai era passato troppo tempo e i termini erano scaduti!!!

Non so... io di questi kit non ne voglio pi� sentir parlare... ma magari adesso sono veramente migliorati!

Crick82
Utente Junior

139 Messaggi

Inserito il - 01 novembre 2006 : 00:00:39

Grazie per il suggerimento, ero indeciso se provare o meno questo kit, ma dopo le tue parole propender� per il no! Infondo a volte � meglio non cambiare la via vecchia per la nuova!