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Laurettahappy
Nuovo Arrivato

Citt�: varese

53 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2011 : 12:30:35

Ciao a tutti,
da cosa pu� dipendere una bassa efficienza di qPCR? I primer che utilizzo erano gi� stati testati da altri in lab e avevano una buona efficienza intorno al 100%. Preparo le diluizioni della curva std nello stesso modo, stesso tipo di campione di partenza (ma non identico).

picchiasebino
Nuovo Arrivato

Citt�: roma

52 Messaggi

Inserito il - 23 maggio 2011 : 10:48:15

Intanto assicurati che il metodo � validato e non solo "testato"...
Assicirati di non aver fatto errori nelle concentrazioni, volumi, ecc.
Verifica che il DNA sia integro e pulito: gel oppure analisi spettrofotometrica (es. rapporto A260/A280). Infine, importante, verifica che i delta Ct tra le diluizioni siano rispettati.