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Discussione

roselady
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: napoli

119 Messaggi

Inserito il - 27 giugno 2011 : 20:19:09

Ciao a tutti :)
Sto studiando la mutagenesi in vitro fatta con la pcr e non ho ben capito(anzi proprio nulla) della PCR usata per fare delle delezioni in un gene di interesse.
Quella per fare inserzioni l'ho capita,penso, ma per le delezioni proprio no,ho letto anche delle discussioni qui sopra ma veramente non ho capito nulla...
C'� un esempio riguardante la "PCR fusion" e mi sembra essere piu chiaro...ma senza questa tecnica in cui si effettuano 2 pcr parallele come si fa?
Anche se non avete capito almeno spoegatemi solo come si fa ad inserire una delezione con la pcr usando primers con mismatch :(
Grazie a tutti e scusatemi per essermi dilungata :( aiutatemi per favore :(

thefery
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 28 giugno 2011 : 15:31:14

ciao!
in linea generale fai due PCR separate, specifiche ciascuna, per il tratto che interessa a te mantenere, usi dei primer particolari pi� lunghi del normale e progettati appositamente per il tuo esperimento, poi i due prodotti di PCR li unisci(i primer particolari servono a questo) a questo punto avrai un frammento ingegnerizzato, mancante del tratto che vuoi tu....

ovviamente le regioni che scegli di amplificare devono fiancheggiare la mutazione.

penso che c siano altre tecniche in ogni caso...

roselady
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: napoli

119 Messaggi

Inserito il - 19 luglio 2011 : 23:49:35

ti ringrazio per la risposta e scusa per il ritardo :) ora ho capito :)