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astrolety
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
 Inserito il - 29 giugno 2011 : 18:14:24
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Ciao a tutti!
sto per procedere con un clonaggio, ho scelto i miei enzimi di restrizione ma mentre controllavo XhoI ho trovato che il datasheet mi dice di inattivarlo per "fenolizzazione" e non a 65°C. qualcuno sa cosa voglia dire???
Grazie a tutti:)
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 29 giugno 2011 : 18:22:46
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| Dal nome mi sa tanto di "aggiunta di fenolo per denaturare l'enzima", ma attendi chi ne sa di più. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 29 giugno 2011 : 20:06:00
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| Sì il concetto è quello detto da 0barra1, però no saprei dirti esattamente quanto aggiungerne. Visto che la Roche è l'unica che ti dice di fare così, le altre ditte ti fanno tranquillamente inattivare Xho I al calore, e non ti dicono niente sul data sheet su come fare, io sentirei direttamente loro! |
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astrolety
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 29 giugno 2011 : 20:11:52
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ok allora intanto provo a chiedere alla roche...
altrimenti pensavo anche ad una estrazione fenolo cloroformio (quindi semplicemente pulisci il DNA ristretto), però non saprei...
per il momento grazie ad entrambi!;) |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 29 giugno 2011 : 20:53:57
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| Sì il fatto è comunque che devi inattivare l'enzima, dover necessariamente purificare mediante fenolo cloroformio dopo restrizione non mi sembra una cosa molto pratica. Ti direi di comprare l'enzima da qualcun altro, ma ovviamente se hai già quello... prova a sentire cosa ti dicono. |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 30 giugno 2011 : 11:15:07
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| Che cosa devi fare dopo la digestione? Perchè se ad esempio devi estrarre un frammento dal gel, puoi anche non disattivare l'enzima, ma caricarlo su gel d'agarosio subito dopo la digestione. |
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Discussione |
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Inattivazione x "fenolizzazione"
Didattica
