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valeriamassa
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
64 Messaggi |
 Inserito il - 04 novembre 2006 : 17:05:13
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Ciao a tutti! Ho un problema: quando provo a fare le mini-prep con l'apposito kit quiagen di un plasmide abbastanza lungo (è il pyex-bx di lievito, 7,1 kb) la resa è bassissima!! Ottengo pochissimo materiale. Qualcuno ha esperienza in tal senso?
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valeria |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2006 : 18:41:55
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Nessuna esperienza in proposito, mai avuto problemi col kit, MA per problemi simili mi era stato consigliato di scaldare l'elution buffer prima di aggiungerlo nell'ultimo step (bagnetto a 37 per 10 minuti).
Oppure puoi provare a partire da più materiale. Per esempio, dopo che hai aggiunto la coltura liquida e hai centrifugato la prima volta, puoi aggiungere nuovamente coltura liquida, centrifugare un'altra volta e poi procedere con il protocollo.
Se ne hai la possibilità prova a cambiare kit, magari le soluzioni di quello che usi sono vecchie!
Ciao ciao |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2006 : 19:29:00
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Anche a me con alcuni plasmidi è capitato di avere una resa bassa!
Oltre a quello che ha detto Valia (sopratturro il fatto del kit con soluzioni vecchie) puoi anche provare ad eluire in meno volume oppure eluire 2 volte ad es 30ul la prima volta e poi altri 30 la seconda o addirittura far passare 2 volte lo stesso eluato dal filtro!
Ciao
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moonycinzia
Utente Junior
234 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2006 : 00:39:14
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Ciao Vale!
per l'eluizione usi il buffer o l'acqua?
Io uso acqua sterile perchè il buffer di eluizione della quiagen mi ha sempre dato una resa bassa.
però forse non è questo il problema.
ciaooooooooooo |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2006 : 12:15:57
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Anche io a volte ho delle rese molto basse, ma ho visto che dipendono dal tipo di cellule di partenza (il ceppo per intendersi) per ovviare raddoppio la coltura ON e poi eluisco conH2O milliQ 30 ul e faccio sempre la doppia eluizione, cioè ricarico l'eluato in colonna e ricentrifugo. ho visto che un po si migliora ma non poi così tanto.
Dipende cosa ci devi fare, per la sequenza può anche andar bene.
Ciao
Sai se il tuo plasmide è un high o low copy? |
Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw |
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mini-prep quiagen
Didattica
