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Autore Discussione  

Geeko
Utente

Ctenophor1.0
Città: Milano


1043 Messaggi
Inserito il - 05 luglio 2011 : 15:53:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi. Domanda rapida riguardo alla classica PCR: perché un eccesso di primers in reazione risulta svantaggioso ai fini del risultato di amplificazione? Cioè perchè inserire più primers del dovuto non è una buona idea? Come influisce questo eccesso nei cicli di amplificazione?

Possibile che vadano ad appaiarsi anche a sequenze non desiderate per la loro eccessiva abbondanza? O il motivo è tutt'altro?

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1043 Messaggi
Inserito il - 06 luglio 2011 : 17:05:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Nessun esperto di PCR all'orizzonte o che passi di qui per sbaglio?
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Livia89
Nuovo Arrivato



9 Messaggi
Inserito il - 06 luglio 2011 : 17:10:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Livia89 Invia a Livia89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quando conduci la PCR in presenza di eccesso di primer l'attività della Tq va incontro a saturazione. Inoltre i primer vanno ad appaiarsi in zone aspecifiche. Questi due aspetti, combinati insieme, fanno si che il risultato della PCR sia caratterizzato da un elevato rumore di fondo. Ciò significa che la taq lavorerà su molte altre sequenze oltre a quelle specifiche (e queste ultime, di conseguenza, verranno amplificate di meno).
Questo è quello che mi è stato spiegato al corso di metodi biochimici. Spero possa esserti utile.
Livia
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Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1043 Messaggi
Inserito il - 06 luglio 2011 : 17:21:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille Livia, ancora non posso cimentarmi con la pratica di lab, ma volevo togliermi questo dubbio lo stesso. Risposta più che esaustiva!
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