| Autore |
Discussione |
|
|
sagraman
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 06 luglio 2011 : 14:31:36
|
Sono diversi giorni che preparo gel d'agarosio dopo estraioni di DNA e dopo Pcr ma ogni volta che guardo la foto dopo aver fatto la corsa le bande nn sono mai lineari. Mi spiego meglio: alle estremità, nella maggior parte delle bande, il campione sembra aver corso di più rispetto alla parte centrale.
é come se le bande abbiano dei "baffi"
Le bande sono lineari nella parte centrale e smussate e spostate maggiormente in avanti alle estremità; diciamo che hanno la forma di una parentesi quadra girata (come "[" ruotata di 90° sulla destra)
Non so se mi sono spiegato bene ad ogni modo se qualcuno ha capito vorrei sapere come evitare questo inconveniente
|
|
|
|
|
Livia89
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 06 luglio 2011 : 15:22:08
|
Ciao Sagraman,
è strano quello che dici...almeno a me questo non è mai capitato. Cmq a volte succede che il campione caricato nei pozzetti esterni corra in modo non proprio lineare come invece accade nella parte centrale.
Ad ogni modo posso darti due suggerimenti:
1)tieni sotto controllo la temperatura...quando fa troppo caldo succede che la corsa per le bande laterali non vada benissimo;
2)non so se tu riusi sempre lo stesso tampone per la corsa, in tal caso prova a cambiarlo. Magari la concentrazione del tampone è aumentata troppo e quindi la corsa va più veloce.
Spero che questi suggerimenti, anche se molto banali, possano aiutarti
Livia |
 |
|
|
sagraman
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 06 luglio 2011 : 15:27:39
|
| Ti ringrazio per questi consigli il tampone è riciclato quindi questo potrebbe essere il problema ad ogni modo nn so se sono riuscito a farmi capire bene...nn sono solo le bande laterali che presentano questo problema, sono tutte le bande ognuna delle quali presenta le estremità esterne smussate e leggermente spostate in avanti... |
|
|
|
Livia89
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 06 luglio 2011 : 16:30:51
|
Ah...no, non avevo capito che era per tutte le bande del tuo gel!
Mi dispiace ma a parte stare attento alla temperatura e alla concentrazione del tampone che usi non so proprio cosa altro consigliarti.
Rispetto a quando non avevi questo problema, carichi sempre gli stessi ul di campione, usi sempre lo stesso voltaggio e cassetta di corsa? Da quando ti è iniziato?
Spero tu possa risolverlo presto perchè immagino quanto sia fastidioso.
Livia
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 00:07:52
|
Questo succede quando il campione è molto e quando si fa migrare il gel velocemente, per avere delle bande più "lisce" fai migrare il gel a voltaggio inferiore e casomai aumenta il tempo se vuoi avere una separazione migliore.
Comunque in genere questo non crea grossi problemi, è solo non bellissimo da vedere, se devi solo valutare la presenza o assenza della banda puoi non preoccupartene affatto, se invece ti serve avere delle belle foto o magari devi excidere la banda da gel fai migrare il gel più lentamente.
 |
|
|
|
roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 13:02:12
|
| Pare che preparare il gel aggiungendovi direttamente il bromuro d'etidio di alle bande il cosiddetto 'smiling shape'. Oltre, ovviamente, al fatto che ad alte velocità di corsa si puo' andare incontro a tale problema. Prova a far avvenire la corsa ad un voltaggio più basso (come suggerito da GFPina!) e a preparare il gel senza BrEt, ma incubandolo in una soluzione di BrEt solo dopo la migrazione per circa 15-20 minuti. |
|
|
| |
Discussione |
|
Gel Agarosio
Didattica
