Salve a tutti...sono nuovo di questo forum...sembra davvero interessante... C'è un quesito a cui ancora non mi sono dato una risposta, riguardo il TAE: perchè utilizzare un tampone forte come il TRIS acetato per la separazione del DNA? Qual'è la sua funzione? perchè non utilizzare un tampone meno forte, tipo un tampone salino?
Nulla vieta di usare un altro tampone, di solito si usa il Tris principalmente per due motivi:
1) quello ovvio di tenere costante il pH. L'estrazione di acidi nucleici (soprattutto RNA) può essere abbastanza rognosa... meglio avere un tampone forte che ti tenga fisso il pH. Inoltre sali inorganici possono facilmente interferire con successive manipolazioni che fai sul DNA/RNA (es. PCR).
2) il Tris aiuta a permeabilizzare la membrana, interagendo con i fosfolipidi e quindi migliora la resa di estrazione
Il tris è il tampone utilizzato in tutte le elettroforesi (o quasi) comprese quelle di proteine. Perchè poi non si dovrebbe utilizzare un tampone forte come il tris? Nell'elettroforesi il pH rappresenta una variabile molto importante in grado di modificare completamente il pattern delle bande anche per variazioni minime. Per una riproducibilità di tecnica è necessario che anche le più piccole interferenze sul pH vengano annullate. Ciao