purificare plasmidi e PCR

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Discussione

agnes
Nuovo Arrivato

Prov.: Savona
Citt�: albenga

11 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2006 : 16:50:31

ciao !
vi chiedo un favore: potri avere una semplice spiegazione di cosa significa purificare plasmidi e PCR.

Grazie mille
a presto !

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2006 : 17:15:21

Se ho capito bene cosa intendi,
- "purificare plasmidi" significa estrarre il DNA plasmido da batteri.
Ad es. se devi utilizzare un deteminato plasmide per il clonaggio, inserisci il plasmide in E. Coli, lo fai espandere e alla fine estrai il tuo plasmide da Coli.
Il metodo pi� utilizzato e' l'estrazione mediante colonnine, (come per DNA e RNA), in genere si usano "Mini-prep", "Midi-prep" o "Maxi-prep" a secondo del volume di partenza.

- "purificazione di PCR" � semplicemente la purificazione del tuo prodotto di PCR dai "contaminanti": primers, dNTPs... che sono presenti nella tua provetta assieme all'amplificato! Puoi purificare il tuo frammento di pcr direttamente dalla provetta in cu � avvenuta la reazione oppure far migrare l'amplificato su gel, excidere la banda che ti interessa e poi purificarla. Anche in questo caso il metodo pi� utilizzato e' quello su colonnine.