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samantha78
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 06 ottobre 2011 : 15:01:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di samantha78 Invia a samantha78 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve, ho disperato bisogno di aiuto.....ho preparato il sample buffer per proteine, e il colore è blu, ma qndo aggiungo il campione per caricare diventa tutto giallo......come mai? ke devo far?

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Città: Paris, VIIème arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 06 ottobre 2011 : 15:14:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Da quello che avevo letto tempo fa il BBF, che conferisce la colorazione blu al Loading Buffer, è un indicatore di pH capace di virare al giallo in condizioni acide. E' perciò possibile che il tuo campione proteico sia così acido da non venir tamponato completamente dal Loading Buffer.
Prova a condurre qualche misurazione con il pHmetro.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 06 ottobre 2011 : 19:14:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Pensa a me succedeva esattamente il contrario, il mio era giallo e virava al blu e la cosa era comodissima, non c'era pericolo che mi distraessi e non sapessi se avevo aggiunto il campione o no!

Comunque sì, in genere è una questione di pH, essendo il Blu di Bromofenolo come dice 0barra1 un indicatore di pH.
Non dovrebbe dare fastidio durante l'elettroforesi in ogni caso, ma al massimo puoi aggiungere un po' di NaOH.

Ci sono varie discussioni sul forum su questo argomento:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=6657
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=12151
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=2726
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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi

Inserito il - 06 ottobre 2011 : 20:38:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sicuramente è il pH una volta mentre correvo dei precasted mi accorsi che il fronte cambiava colore a 1/2 gel. Chiamai subito lo specialist dicendo di venirsi a prendere quelle schifezze...
Chiuso OT

Io prima quando facevo ricerca preparavo un 5x non riducente che può essere conservato per + tempo
	                 mL
Tris Hcl 0,5 M pH 6.7	0,250
glicerolo	        0,250
10% SDS	                0,500
0,1%blu Br-fenolo	0,125
Vtot	                1,125

e poi aggiungevo il mercaptoetanolo producendo il buffer 4X
0.2mL di mercapto + 0.8mL di buffer


Se il pH del tris-HCl e già aggiustato on dovresti avere problemi col colore, altrimenti come diceva GFPina puoi aggiungere qualche goccia di NaOH concentrato.

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